ScientificGeneJET全血RNA纯化试剂盒 #K0761使用前请阅读贮存条件（第4页）！ /onebio
1 分析证明书 ThermoScientificGeneJET全血RNA纯化试剂盒经质检合格。
依据本手册提供的实验方案，从500μl人类全血中提取总RNA对该试剂盒进行测评。
通过分光光度测量和琼脂糖凝胶电泳对提取的RNA进行质量鉴定，其A260/280比值介于1.9和2.1之间，且RNA完整性指数（RIN）≥
8。
质量认证人： Jurgita

Zilinskiene
2 内容 页码 试剂盒组分................................................................................................................................

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贮存条件....................................................................................................................................

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产品说明....................................................................................................................................

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实验原理....................................................................................................................................

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注意事项....................................................................................................................................

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需要的其他试剂和仪器............................................................................................................

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实验方案....................................................................................................................................

7 A．哺乳动物全血RNA提取方案..................................................................................7B．从骨髓中提取

RNA....................................................................................................

8C．从白膜层中提取

RNA................................................................................................

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问题分析与解决........................................................................................................................

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安全信息..................................................................................................................................

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3 试剂盒组分 GeneJET全血RNA纯化试剂盒 裂解缓冲液漂洗缓冲液WB1（浓缩）漂洗缓冲液2（浓缩）不含核酸酶的水配有收集管的GeneJETRNA纯化柱收集管（2ml）收集管（1.5ml） 贮存条件 试剂盒的所有组分应在室温条件下（15-25℃）贮存。
#K076150preps40ml40ml23ml30ml505050 产品说明 GeneJETTM全血RNA纯化试剂盒是一个快速、高效从全血以及相关体液中纯化高质量总RNA的系统。
试剂盒中离心柱采用基于硅膜技术的便捷离心柱，无需昂贵的树脂、有毒的酚氯仿抽提和耗时的乙醇沉淀。
在细胞裂解完成以后,标准实验流程在15分钟内即可完成。
纯化的高品质RNA能够广泛用于下游应用，如RT-PCR、RT-qPCR、Northern杂交和其它基于RNA的分析。
实验原理 用小瓶收集血液并加入抗凝血剂保存。
样本在裂解缓冲液中充分裂解。
该裂解缓冲液中 含有硫氰酸胍。
，硫氰酸胍是一种能保护RNA免于内源RNase的分解的离液盐溶液。
裂解 后的混合溶液与乙醇混合后加入到纯化柱中。
当裂解混合溶液离心通过纯化柱时，离液盐和 乙醇使RNA结合到硅膜上。
随后通过漂洗缓冲液清洗纯化柱，能够有效地除去膜上的杂质。
最后纯化的RNA在低离子强度条件下，用不含核酸酶的水洗脱下来。
表
1.不同材料来源其总RNA的标准产量。
来源 样品量 产量，μg 人类血液 500μl 1.2-1.8 小鼠血液 500μl 10-11 大鼠血液 500μl 7.4 兔子血液 500μl 10 骨髓 500μl 1.7 白膜层 500μl 2-
3 4 注意事项 首次使用前，请加入指定体积的乙醇（96-100％）到漂洗缓冲液WB1（浓缩的）和漂洗缓冲液2（浓缩的）： 50次（#K0801） 漂洗缓冲液WB1漂洗缓冲液
2 浓缩的漂洗缓冲液40ml 23ml 乙醇（96-100％）4.5ml 39ml 总体积44.5ml 62ml 加入乙醇后，请在瓶盖上做好标记表明已加入乙醇。
在每次纯化RNA实验前，现配适量的含有β-巯基乙醇的裂解缓冲液。
。
每1ml裂解缓冲液中加入20μl浓度为14.3M的β-巯基乙醇。
配制好的裂解缓存液在4℃条件下可储存1个月。
每次使用前检查裂解缓冲液是否出现盐沉淀。
若出现盐沉淀，将溶液置于37℃重新溶解，之后冷却至25℃后再使用。
裂解缓冲液和漂洗缓冲液WB1含有刺激性物质（参考第10页的安全信息），接触皮肤、吸入、吞食会造成伤害，使用时请戴好手套。
除特别指明，所有的纯化步骤都在室温条件下（15-25℃）进行。
所给的rpm形式的离心速度适用于24孔离心机。
标准情况下，纯化的RNA其A260/280比值在1.9和2.1之间。
但是，当RNA浓度低 于20ng/μl时，偶尔发现该比值会偏离预期。
需要的其他试剂和仪器 β-巯基乙醇移液器和枪头涡旋仪乙醇（96-100％）1.5ml离心管离心机一次性手套
5 避免核糖核酸酶污染 RNA的纯度和完整性对下游实验非常重要。
RNaseA能降解RNA，是一种实验环境中常见的非常稳定的污染物。
实验中需注意避免将RNase带入RNA产物中，尤其在用漂洗缓冲液2漂洗纯化柱步骤及洗脱RNA的步骤。
避免RNase污染的建议：皮肤是RNase的常见来源，所以处理RNA或试剂时请戴上手套。
同时经常更换手套。
使用无菌、一次性的枪头。
使用适当的试剂处理非一次性的物品（移液器、离心机）和实验桌面，以去除RNase的污染。
未使用试剂盒时请保持组分密封。
使用后请立即盖上瓶盖。
起始样本处理和储存 血液样本的收集和血细胞RNA的提取应在同一天进行。
样本在4℃条件下储存不超过5个小时。
请勿冻存血液样本。
如果在同一天不能提取样本RNA，RNA可保存于提供的裂解缓冲液中：-将血液4℃400×g（~2000rpm）离心5分钟-弃掉上清-将沉淀用600μl的裂解缓冲液重悬，混合均匀稳定的样本可在4℃保存24小时，或者-20℃保存一周。

6 实验方案 从白膜层和骨髓中提取RNA的方案见第8页。

A、哺乳动物全血RNA提取方案 步骤过程
1 将50-500μl血液以400×g（~2000rpm），4℃离心5分钟，弃掉上清。

2 沉淀用600μl裂解缓冲液重悬，涡旋混匀。

3 加入450μl乙醇（96-100％），通过移液器吸打或涡旋混合均匀。
将一半已制备好的混合液转入放置在收集管上的纯化柱中。
以12000×g （~11000rpm）离心1分钟。
弃掉流穿液，将纯化柱重新放入收集管中。
将剩
4 余的裂解混合液转入该纯化柱并离心，弃掉含流穿液的收集管。
将纯化柱放入 一个新的2ml收集管（已提供）。
向纯化柱中加入700μl的漂洗缓冲液1（已加入乙醇）。
12000×g离心1分钟
5 (~11000rpm)。
弃掉流穿液，将纯化柱放回收集管中。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液2（已加入乙醇），12000×g离心1分钟
6 (~11000rpm)。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液2（已加入乙醇），12000×g离心2分钟 (~11000rpm)。

7 推荐：清空收集管，将纯化柱放回收集管中，并再次将纯化柱以最大速度（≥ 20,000×g，≥14,000rpm)离心1分钟。
弃掉含流穿液的收集管，将纯化柱转移入1.5ml无菌的离心管中。
向纯化柱的膜中央加入50μl不含核酸酶的水，以12000×g（~11,000rpm）的
8 速度离心1分钟。
弃掉纯化柱。
将纯化的RNA立即用于下游实验或者贮存于-20℃备用。
RNA
9 提取后或使用RNA时，始终将其置于冰上。
注：推荐将RNA储存于-70℃，以保存更长时间（1个月以上）。

7 B、从骨髓中提取RNA 注：事先冻存的骨髓离心后不会发生沉淀。
可使用350μl解冻的骨髓，后续步骤直接进入 哺乳动物全血RNA提取方案的步骤
2。
步骤过程
1 取50-500μl新鲜的骨髓。

2 在4℃条件下以400×g（~2000rpm）离心5分钟，弃掉上清。

3 后续操作接第7页哺乳动物全血RNA提取方案的步骤
2。
C：从白膜层中提取RNA白膜层全血中富含白细胞的组分，其所含核酸量比同体积全血多5-10倍。
白膜层样品的制备方法为：2,000×g室温离心全血样品10分钟。
离心后全血分为明显的3层：最上层为血浆；中间的为白膜层（也称WBCs），汇集白细胞；而底层汇集红细胞。
步骤123 456 过程室温下以2,000×g的速度离心10mL全血样品10分钟。
离心后将观察到全血分为3层。
吸除上清。
用自动移液器收集约500μl中间层物质，注意不要使WBCs浑浊。
将WBCs放入新的反应管中。
加入10ml红细胞裂解液（10mMTris-HCl，PH7.0，5mlMgCl2,10mMNaCl），重悬WBCs。
室温下以2,000×g的速度离心10分钟。
弃掉上清，勿丢弃离心沉淀物。
后续操作接第7页全血RNA提取方案的步骤
2。

8 问题分析与解决 问题纯化的RNA产量低 纯化的RNA发生降解 下游酶反应受到抑制 纯化柱堵塞 可能的原因及解决方案样品材料过多减少所用的起始样品量，在裂解步骤中不要使用多于推荐量的血液。
裂解液中未加入乙醇在将样品加入纯化柱前，确保向裂解液中加入乙醇。
裂解液未与乙醇充分混合向裂解液中加入乙醇后，通过涡旋或吸打使样品充分混匀。
漂洗缓冲液中未加入乙醇确保首次使用漂洗缓冲液WB1和漂洗缓冲液2时向其中加入乙醇，按照第5页关于漂洗缓冲液的说明。
RNase污染为避免核糖核酸酶污染，实验过程每个步骤请戴上手套，包括RNA提取、纯化和后续实验。
经常更换手套。
使用无菌的、一次性的枪头。
除去非一次性用具及实验桌面的RNase污染。
样品贮存条件不合适固定在裂解液中的血细胞在4℃条件下贮存不能超过24小时，-20℃条件下不能超过7天。
纯化的RNA未正确储存纯化的RNA应立即用于下游实验或贮存于-20℃供以后使用。
若需更长时间贮存（超过1个月），推荐贮存于-70℃。
纯化的RNA中含有残留乙醇如果用漂洗缓冲液2漂洗后纯化柱里含有残留溶液，将收集管倒空并将纯化柱以最大速度（≥20000×g，11000rpm）离心1分钟。
纯化的RNA中含有残留盐分按照正确的顺序使用漂洗缓冲液。
始终先用漂洗缓冲液WB1，再用漂洗缓冲液
2。
起始样品量过多减少所用的起始样本量，在裂解步骤中不要使用多于推荐量的血液或细胞。
起始样品材料未充分裂解在以后实验中减少起始样本量。

9 安全信息 裂解液 Xn有害有害组分标识：硫氰酸胍 危险性描述 R22 吞食有害 R36/38对眼睛和皮肤具有刺激性 安全措施 S23 请勿吸入气体/烟雾/蒸汽/喷雾 S26 若溅入眼睛，立即用大量清水冲洗，并寻求医生治疗 S36/37穿戴合适的防护服和手套 S60 该物质及其容器必须作为危险废物处置 漂洗缓冲液WB1 Xn有害有害组分标识：盐酸胍 危险性描述 R22 吞食有害 R36/38对眼睛和皮肤具有刺激性 安全措施 S23 请勿吸入气体/烟雾/蒸汽/喷雾 S26 若溅入眼睛，立即用大量清水冲洗，并寻求医生治疗 S36/37穿戴合适的防护服和手套 S60 该物质及其容器必须作为危险废物处置 GeneJET为ThermoFisherScientific公司的注册商标。
产品使用限制本产品的开发、设计及销售专供研究和体外试验使用。
本产品不得用于诊断试验或药物 开发，也不适合向人或动物注射。
了解本产品的材料安全数据表，请浏览/onebio。
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