（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）
产品货号：E-EL-M0053c产品规格：96T/48T/24T/96T*
5 Elabscience®小鼠C反应蛋白(CRP)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书 MouseCRP(C-ReactiveProtein)ELISAKit 使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们： 销售部电话技术部电话电子邮箱（销售）电子邮箱（技术）网址 027-65022280，027-87854967027-87526315Perry@techsupport@ 具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。
-1- 用途该试剂盒用于体外定量检测小鼠血清、血浆或其它相关生物液体中CRP浓度。
基本性能 性能灵敏度检测范围特异性重复性 0.02ng/mL0.03-25ng/mL可检测样本中的小鼠CRP，且与其它类似物无明显交叉反应板内，板间变异系数均<10% 检测原理 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。
用抗小鼠CRP抗体包被于酶标板上，实验时样品（或标准品）中的小鼠CRP会与包被抗体结合。
后依次加入生物素化的抗小鼠CRP抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素，抗小鼠CRP抗体与结合在包被抗体上的小鼠CRP结合，生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。
加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。
用酶标仪在450nm波长处测OD值，CRP浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中CRP的浓度。
-2- 试剂盒组成及保存 未拆封的试剂盒可在2-8℃保存一周；如果一周以后才使用试剂盒，请拆开试剂盒并按照下表中的条件分别保存各组分。
中文名称 规格 开封后保存条件 96T：8孔×12条 ELISA酶标板 48T：8孔×6条 MicroELISAPlate 24T：8孔×3条 96T*5：5块96T酶标板 冻干标准品ReferenceStandard 96T：2支48T/24T：1支96T*5：10支 -20℃,可存放6个月 浓缩生物素化抗体(100×) 96T：1支120μ
L ConcentratedBiotinylatedDetection48T/24T：1支60μ
L Ab(100×) 96T*5：5支120μ
L 浓缩HRP酶结合物（100×）ConcentratedHRPConjugate（100×） 96T：1支120μL48T/24T：1支60μL96T*5：5支120μ
L -20℃(避光)可存放6个月 标准品&样品稀释液 96T/48T/24T：1瓶20mL ReferenceStandard&SampleDiluent96T*5：5瓶20mL 生物素化抗体稀释液 96T/48T/24T：1瓶14mL BiotinylatedDetectionAbDiluent酶结合物稀释液 96T*5：5瓶14mL96T/48T/24T：1瓶14mL 2-8℃,可存放6个月 HRPConjugateDiluent 96T*5：5瓶14mL 浓缩洗涤液(25×) 96T/48T/24T：1瓶30mL ConcentratedWashBuffer(25×) 96T*5：5瓶30mL 底物溶液(TMB)SubstrateReagent 96T/48T/24T：1瓶10mL96T*5：5瓶10mL 2-8℃(避光) 反应终止液Solution 96T/48T/24T：1瓶10mL96T*5：5瓶10mL 2-8℃ 封板覆膜 96T/48T/24T：5张 PlateSealer 96T*5：25张 产品说明书Manual 1份 质检报告CertificateofAnalysis 1份 说明：所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。
试剂体积以实际发货版说明书为准。
相关试剂在分装时会比标签上 标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出。
-3- 试验所需自备物品
1.酶标仪(450nm波长滤光片)
2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL,2-20μL,20-200μL,200-1000μL3.37℃恒温箱，
4.双蒸水或去离子水
5.吸水纸
6.加样槽 样品收集方法(具体处理方法可参考官网：)
1.血清：全血样品于室温放置1小时或2-8℃过夜后于2-8℃，1000×g离心20分钟，取上清即可检测。
2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于2-8℃，1000×g离心15分钟，取上清即可检测。
3.组织匀浆：用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。
为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。
最后将匀浆液于2-8℃，5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
4.细胞提取液：贴壁细胞用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。
收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。
每106个细胞中加入150-200μLPBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。
将提取液于2-8℃，1500×g离心10分钟，取上清检测。
5.细胞培养上清或其他生物体液：收集液体后于2-8℃，1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。
取上清检测。
注意事项试剂盒注意事项1)本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断。
2)试验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。
特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。
3)刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按照上述表格中保存条件存放。
4)请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。
未用完的浓缩生物素化抗体(100×)、浓缩HRP酶结合物(100×)、酶 -4- 标板及其他原液按照上述表格中保存条件存放。
5)检测使用的酶标仪需要安装能检测450±10nm波长的滤光片，光密度范 围在0-3.5之间。
建议使用时提前15分钟预热。
6)请勿使用其他批号或其他来源的试剂混合或替代本试剂盒中的试剂。
7)试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用。
8)请勿使用过期的试剂。
样品注意事项1)收集血液的试管应为一次性无内毒素试管。
避免使用溶血，高血脂样品。
2)样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃，若不能及时检测，请按 一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃(3个月内检测)，避免反复冻融。
在检测前，冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物。
室温混匀后使用。
3)试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围，建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本的实际浓度情况。
如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。
4)若所检样本不在说明书所列样本之中，建议做预实验验证其检测有效性。
5)若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液，由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。
6)某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。
样本稀释方案请提前预估样本的浓度范围，如果您的检测样本需要稀释，参考稀释方案如下： 稀释100倍：一步稀释。
取5μL样本到495μL标准品&样本稀释液内，做100倍稀释；稀释1000倍：两步稀释。
取5μL样本到95μL标准品&样本稀释液内，做20倍稀释，再取5μL20倍稀释样本到245μL标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释1000倍；稀释100000倍：三步稀释。
取5μL样本到195μL标准品&样本稀释液内，做40倍稀释，再取5μL40倍稀释样本到245μL标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，最后取5μL2000倍稀释样本到245μL标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释100000倍；每步稀释时取液量不少于3μ
L，稀释倍数不超过100倍。
每步稀释都需混合均匀，避免起泡。
-5- 检测前准备工作
1.提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温(18-25℃)。
如果试剂盒需分 多次使用，请仅取出本次实验所需的酶标板条和试剂，剩余板条和试剂需 按照指定条件保存。
2.洗涤液：将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:24)。
提示：从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液。
当日使用。
3.标准品工作液：将标准品于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，轻轻混匀，避免起泡，配成25ng/mL的标准品工作液(或加入1mL标准品&样品稀释液后，静置1-2分钟，用低速涡旋仪充分混匀。
可通过低速离心去除涡旋过程中产生的气泡)。
然后根据需要进行倍比稀释。
建议配制成以下浓度：25、8.33、2.78、0.93、0.31、0.1、0.03、0ng/mL。
倍比稀释方法：取7支EP管，每管中加入600μL标准品&样品稀释液,从25ng/mL的标准品工作液中吸取300μL到第一支EP管中混匀配成8.33ng/mL的标准品工作液，按此步骤往后依次吸取混匀。
如下图。
提示：最后一管直 接作为空白孔，不需要再从倒数第二管中吸取液体。
25 8.33 2.78 0.93 0.31 0.1 0.03
0 4.生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量(以100
μL/孔计算)，实际配制时应多配制100-200μ
L。
使用前15分钟，将浓缩生物素化抗体于800×g离心1分钟，以生物素化抗体稀释液将100×浓缩生物素化抗体稀释成1×工作浓度(例如：10μL浓缩液+990μL稀释液)。
5.酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计算)，实际配制时应多配制100-200μ
L。
使用前15分钟，将浓缩HRP酶结合物于800×g离心1分钟，以酶结合物稀释液将100×浓缩HRP酶结合物稀释成1×工作浓度(例如：10μL浓缩液+990μL稀释液)。
-6- 操作步骤
1.分别设定标准孔、空白孔和样本孔。
标准孔加入100μL倍比稀释的标准品， 空白孔加入100μL标准品&样本稀释液，其余孔加入100μL待测样本(建议所有的待检样本和标准品在检测中设立复孔)。
给酶标板覆膜，37℃孵育90分钟。
提示：加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，避免产生气泡。
加样时间宜控制在10分钟内。
2.甩尽孔内液体，不用洗涤。
每个孔中加入生物素化抗体工作液100μ
L，酶标板加上覆膜，37℃温育1小时。
3.甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干。
每孔加洗涤液350μ
L，浸泡1分钟，吸去或甩掉酶标板内的液体，拍干。
重复此洗板步骤3次。
提示：此处与其他洗板步骤都可使用洗板机(参考北京拓普DEM-3型洗板机参数设置：2点吸，每孔加入洗涤液350μ
L，振板5秒，吸液0.5秒)。
洗板完成后请立即进行下步操作，不要让微孔板干燥。
4.每孔加酶结合物工作液100μ
L，酶标板加上覆膜，37℃温育30分钟。
5.甩尽孔内液体，洗板5次，方法同步骤
3。
6.每孔加底物溶液(TMB)90μ
L，酶标板加上覆膜，37℃避光孵育15分钟左右。
提示：根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过30分钟。
当标准孔出现明显梯度时(前4个显色孔出现明显蓝色梯度)，即可终止。
提前15分钟打开酶标仪预热。
7.每孔加终止液50μ
L，终止反应。
提示：终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。
8.立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(OD值)。
-7- 操作一览表 -8- 结果判断
1.计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。
以 浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在双对数坐标轴上拟合四参数逻辑函数的标准曲线，操作详情请参阅“Elabscience”官网/微信公众号内技术文章(作图时去掉空白组的值)。
2.若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
典型数据以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
ng/mL OD 校正OD 标曲 25 2.45 2.393 10 8.33 1.59 1.533 OpticalDensity 2.780.8820.8251 0.93 0.5 0.443 0.31 0.261 0.204 0.1 0.1 0.178 0.121 0.03 0.126 0.069
0 0.057 - 0.01 0.01 0.1
1 10 100 Mouse
CRPconcentration(ng/mL) 性能精密度板内精密度：低，中，高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度：低，中，高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
批内变异系数 批间变异系数 样本
1 2
3 1
2 3 数量 20 20 20 20 20 20 平均值(ng/mL) 0.2 0.92 5.83 0.21 0.89 5.29 标准差 0.01 0.05 0.19 0.01 0.04 0.21 变异系数
(%) 6.14 4.9 3.29 6.63 4.86 3.9 -9- 回收率分别往不同样本中添加已知浓度的小鼠CRP，做回收实验，得出回收率范围和平均回收率。
样本类型 回收率范围(%) 平均回收率(%) 血清(n=8) 94-110 101 血浆(EDTA)(n=8) 87-102 94 细胞培养基(n=8) 91-104 96 线性将添加有小鼠CRP的样本分别稀释2倍，4倍，8倍，16倍做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。
血清(n=5) 回收率范围(%)87-1001:
2 平均回收率(%)94 回收率范围(%)82-981:
4 平均回收率(%)89 回收率范围(%)90-1031:
8 平均回收率(%)96 回收率范围(%)85-991:16 平均回收率(%)92 血浆(EDTA)(n=5)89-1039689-1039492-1069890-10698 细胞培养基(n=5)88-1039489-1029690-1009588-10193 -10- 问题分析若实验效果不好，请及时对显色结果拍照，保存实验数据，保留所用板条及未使用试剂，然后联系我公司技术支持为您解决问题。
同时您也可以参考以下资料： 问题描述 可能原因吸液或加液不准 相应对策检查移液器及吸头 标准曲线梯度差 标准品稀释不正确 洗涤不完全孵育时间太短 溶解标准品时稍微旋转瓶身，轻轻混匀使粉末完全溶解 保证洗涤时间和洗涤次数及每孔的加液量保证充足的孵育时间 实验温度不正确 使用推荐的实验温度 显色很弱或无色 试剂体积不够或漏加稀释不正确 检查吸液及加液过程，保证所有试剂按顺序足量添加 酶标记物失活或底物失效 混合酶结合物和底物，通过迅速显色来检查判断 读数数值低酶标仪设置不正确 在酶标仪上检查波长及滤光片设置提前打开酶标仪预热 变异系数大背景值高 加液不正确检测抗体的工作浓度过高 酶标板洗涤不完全 检查加液情况 使用推荐的稀释倍数 保证每步清洗完全；如果用自动洗板机，请检查所有的出口是否有堵塞；是否使用试剂盒配备的洗涤液 灵敏度低 洗液有污染ELISA试剂盒保存不当读数前未终止 配制新鲜的洗液按说明书要求保存相关试剂OD读数前应在每孔中加入终止液 -11- 声明
1.限于现有条件及科学技术水平，尚不能对所有原料进行全面的鉴定分析， 本产品可能存在一定的质量技术风险。
2.本试剂盒在研发过程中去除/降低了生物学样本中的一些内源性干扰因素， 并非所有可能影响的因素均已去除。
3.最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境 等因素密切相关，本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本可能的使用量，预留充足的样本。
4.为了达到好的实验结果，请只使用本公司试剂盒内提供的试剂，不要混用其他制造商的产品，严格按照说明书操作。
5.由于操作过程中试剂制备以及酶标仪参数设置不正确，可能导致结果异常，实验前请仔细阅读说明书并调整好仪器。
6.即使是相同人员操作也可能在两次独立实验中得到不同的结果，为保证结果的重现性，需要控制实验过程中每一步的操作。
7.试剂盒发货前会经过严格的质检，然而，因为运输条件、实验设备差异等等因素影响，用户检测结果可能跟出厂数据不一致。
不同批次间试剂盒间的差异也可能来自上述原因。
8.本试剂盒未与其他厂家同类试剂盒或不同方法检测同一目的物的产品进行对比，所以不排除检测结果不一致的情况。
9.试剂盒仅供研究使用，如将其用于临床诊断或任何其他用途，我公司将不对因此产生的问题负责，亦不承担任何法律责任。
-12- MouseCRP(C-ReactiveProtein)ELISAKit CatalogNo:E-EL-M0053cSize:96T/48T/24T/96T*
5 Intendeduse ThisELISAkitappliestotheinvitroquantitativedeterminationofMouseCRPconcentrationsinserum,plasmaandotherbiologicalfluids. Character ItemSensitivityDetectionRange Specificity Repeatability 0.02ng/mL 0.03-25ng/mLThiskitrecognizesMouseCRPinsamples.NosignificantcrossreactivityorinterferencebetweenMouseCRPandanalogueswasobservedCoefficientofvariationis<10% Testprinciple ThisELISAkitusestheSandwich-ELISAprinciple.ThemicroELISAplateprovidedinthiskithasbeenpre-coatedwithanantibodyspecifictoMouseCRP.Samples(orStandards)areaddedtothemicroELISAplatewellsbinedwiththespecificantibody.ThenabiotinylateddetectionantibodyspecificforMouseCRPandAvidinHorseradishPeroxidase(HRP)conjugateareaddedessivelytoeachmicroplatewellandincubated.ponentsarewashedaway.Thesubstratesolutionisaddedtoeachwell.OnlythosewellsthatcontainMouseCRP,biotinylateddetectionantibodyandAvidin-HRPconjugatewillappearblueincolor.Theenzyme-substratereactionisterminatedbytheadditionofsolutionandthecolorturnsyellow.Theopticaldensity(OD)ismeasuredspectrophotometricallyatawavelengthof450±2nm.TheODvalueisproportionaltotheconcentrationofMouseCRP.YoucancalculatetheconcentrationofMouseCRPinthesamplesparingtheODofthesamplestothestandardcurve. -13- ponents&Storage Anunopenedkitcanbestoredat2-8℃for1week.Ifthekitisnotsupposedtobeusedwithin1week,storetheitemsseparatelyordingtothefollowingconditionsoncethekitisreceived. Item Specifications Storage MicroELISAPlate(Dismountable) ReferenceStandard 96T:8wells×12strips48T:8wells×6strips24T:8wells×3strips96T*5:5plates,96T 96T:2vials48T/24T:1vial96T*5:10vials -20℃,6months ConcentratedBiotinylatedDetectionAb(100×) ConcentratedHRPConjugate(100×) ReferenceStandard&SampleDiluent 96T:1vial,120μL48T/24T:1vial,60μL96T*5:5vials,120μL 96T:1vial,120μL48T/24T:1vial,60μL96T*5:5vials,120μL 96T/48T/24T:1vial,20mL96T*5:5vials,20mL -20℃(Protectfromlight),6months BiotinylatedDetectionAbDiluent HRPConjugateDiluent 96T/48T/24T:1vial,14mL96T*5:5vials,14mL 96T/48T/24T:1vial,14mL96T*5:5vials,14mL 2-8℃,6months ConcentratedWashBuffer(25×) 96T/48T/24T:1vial,30mL96T*5:5vials,30mL SubstrateReagent 96T/48T/24T:1vial,10mL96T*5:5vials,10mL 2-8℃(Protectfromlight) Solution 96T/48T/24T:1vial,10mL96T*5:5vials,10mL 2-8℃ PlateSealer 96T/48T/24T:5pieces96T*5:25pieces ProductDescription 1copy CertificateofAnalysis 1copy Note:Allreagentbottlecapsmustbetightenedtopreventevaporationandmicrobialpollution.Thevolumeofreagentsinpartialshipmentsisalittlemorethanthevolumemarkedonthelabel,pleaseuseuratemeasuringequipmentinsteadofdirectlypouringintothevial(s). -14- Othersuppliesrequired Microplatereaderwith450nmwavelengthfilterHigh-precisiontransferpipette,EPtubesanddisposablepipettetipsIncubatorcapableofmaintaining37℃DeionizedordistilledwaterAbsorbentpaperLoadingslot Samplecollection (Moredetailedinformationpleaseviewourwebsite:/List–detail-241.html)Serum:Allowsamplestoclotfor1houratroomtemperatureorovernightat2-8℃beforecentrifugationfor20minat1000×gat2-8℃.Collectthesupernatanttocarryouttheassay.Plasma:CollectplasmausingEDTA-Na2asananticoagulant.Centrifugesamplesfor15minat1000×gat2-8℃within30minofcollection.Collectthesupernatanttocarryouttheassay.Tissuehomogenates:Itismendedtogetdetailedreferencesfromtheliteraturebeforeanalyzingdifferenttissuetypes.Forgeneralinformation,hemolyzedbloodmayaffecttheresults,sothetissuesshouldbemincedintosmallpiecesandrinsedinice-coldPBS(0.01M,pH=7.4)toremoveexcessbloodthoroughly.TissuepiecesshouldbeweighedandthenhomogenizedinPBS(tissueweight(g):PBS(mL)volume=1:9)withaglasshomogenizeronice.Tofurtherbreakdownthecells,youcansonicatethesuspensionwithanultrasoniccelldisrupterorsubjectittofreeze-thawcycles.Thehomogenatesarethencentrifugedfor5-10minat5000×gat2-8℃togetthesupernatant.Celllysates:Foradherentcells,gentlywashthecellswithmoderateamountofpre-cooledPBSanddissociatethecellsusingtrypsin.Collectthecellsuspensionintoacentrifugetubeandcentrifugefor5minat1000×g.Discardthemediumandwashthecells3timeswithpre-cooledPBS.Foreach1×106cells,add150-250μLofpre-cooledPBStokeepthecellssuspended.Repeatthefreeze-thawprocessseveraltimesoruseanultrasoniccelldisrupteruntilthecellsarefullylysed.Centrifugefor10minat1500×gat2-8℃.Removethecellfragments,collectthesupernatanttocarryouttheassay.Cellculturesupernatantorotherbiologicalfluids:Centrifugesamplesfor20minat1000×gat2-8℃.Collectthesupernatanttocarryouttheassay. -15- Note 1)2) 3) 4) 5) 6)7)8) NoteforkitForresearchuseonly.Notforuseindiagnosticprocedures.Pleasewearlabcoats,eyeprotectionandlatexglovesforprotection.Pleaseperformtheexperimentfollowingthenationalsecurityprotocolsofbiologicallaboratories,especiallywhendetectingbloodsamplesorotherbodilyfluids.AfreshlyopenedELISAplatemayappearawater-likesubstance,whichisnormalandwillnothaveanyimpactontheexperimentalresults.Returntheunusedwellstothefoilpouchandstoreordingtotheconditionssuggestedintheabovetable.Donotreusethereconstitutedstandard,biotinylateddetectionAbworkingsolution,concentratedHRPconjugateworkingsolution.TheunspentundilutedconcentratedbiotinylateddetectionAb(100×)andotherstocksolutionsshouldbestoredordingtothestorageconditionsintheabovetable.Themicroplatereadershouldbeabletobeinstalledwithafilterthatcandetectthewavelengthat450±10nm.Theopticaldensityshouldbewithin0-3.5.FollowtheInstructionsoftheMicroplateReaderforset-upandpreheatitfor15minbeforeODmeasurement.Donotmixorsubstitutereagentswiththosefromotherlotsorsources.Changepipettetipsinbetweenaddingofeachstandardlevel,betweensampleaddingandbetweenreagentadding.Also,useseparatereservoirsforeachreagent.Thekitshouldnotbeusedbeyondtheexpirationdateonthekitlabel. Noteforsample1)Tubesforbloodcollectionshouldbedisposableandbenon-endotoxin.Samples withhighhemolysisormuchlipidarenotsuitableforELISAassay.2)Samplesshouldbeassayedwithin7dayswhenstoredat2-8℃,otherwisesamples mustbedividedupandstoredat-20℃(≤1month)or-80℃(≤3months).Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.Priortoassay,thefrozensamplesshouldbeslowlythawedandcentrifugedtoremoveprecipitates.3)Pleasepredicttheconcentrationbeforeassaying.Ifthesampleconcentrationisnotwithintherangeofthestandardcurve,usersmustdeterminetheoptimalsampledilutionsfortheirparticularexperiments.4)Ifthesampletypeisnotincludedinthemanual,apreliminaryexperimentissuggestedtoverifythevalidity.5)Ifalysisbufferisusedtopreparetissuehomogenatesorcelllysates,thereisapossibilityofcausingadeviationduetotheintroducedchemicalsubstance.6)Somebinantproteinmaynotbedetectedduetoamismatchingwiththecoatedantibodyordetectionantibody. -16- DilutionMethod Pleasepredicttheconcentrationrangeofthesampleinadvance.Ifyourtestsampleneedsdilution,pleaserefertothedilutionmethodasfollows:For100folddilution:One-stepdilution.Add5μLsampleto495μLsamplediluenttoyield100folddilution.For1000folddilution:Two-stepdilution.Add5μLsampleto95μLsamplediluenttoyield20folddilution,thenadd5μL20folddilutedsampleto245μLsamplediluent,afterthis,theneatsamplehasbeendilutedat1000foldessfully.For100000folddilution:Three-stepdilution.Add5μLsampleto195μLsamplediluenttoyield40folddilution,thenadd5μL40folddilutedsampleto245μLsamplediluenttoyield50folddilution,andfinallyadd5μL2000folddilutedsampleto245μLsamplediluent,afterthis,theneatsamplehasbeendilutedat100000foldessfully. Reagentpreparation
1.Bringallreagentstoroomtemperature(18-25℃)beforeuse.Ifthekitwillnotbeusedupinoneassay,pleaseonlytakeoutthenecessarystripsandreagentsforpresentexperiment,andstoretheremainingstripsandreagentsatrequiredcondition.
2.WashBuffer:Dilute30mLofConcentratedWashBufferwith720mLofdeionizedordistilledwatertoprepare750mLofWashBuffer.Note:ifcrystalshaveformedintheconcentrate,warmitina40℃waterbathandmixitgentlyuntilthecrystalspletelydissolved.
3.Standardworkingsolution:Centrifugethestandardat10,000×gfor1min.Add1mLofReferenceStandard&SampleDiluent,letitstandfor10minandinvertitgentlyseveraltimes.Afteritdissolvesfully,mixitthoroughlywithapipette.Thisreconstitutionproducesaworkingsolutionof25ng/mL(oradd1mLofReferenceStandard&SampleDiluent,letitstandfor1-2minandthenmixitthoroughlywithavortexmeteroflowspeed.Bubblesgeneratedduringvortexcouldberemovedbycentrifugingatarelativelylowspeed).Thenmakeserialdilutionsasneeded.Themendeddilutiongradientisasfollows:25,8.33,2.78,0.93,0.31,0.1,0.03,0ng/mL.Dilutionmethod:Take7EPtubes,add600μLofReferenceStandard&SampleDiluenttoeachtube.Pipette300μLofthe25ng/mLworkingsolutiontothefirsttubeandmixuptoproducea8.33ng/mLworkingsolution.Pipette300μLofthesolutionfromtheformertubeintothelatteroneordingtothisstep.Theillustrationbelowisforreference.Note:thelasttubeisregardedasablank.Don’tpipettesolutionintoitfromtheformertube.(Theoperationdiagramisshownonthenextpage) -17- 25 8.33 2.78 0.93 0.31 0.1 0.03
0 4.BiotinylatedDetectionAbworkingsolution:Calculatetherequiredamountbeforetheexperiment(100μL/well).Inpreparation,slightlymorethancalculatedshouldbeprepared.CentrifugetheConcentratedBiotinylatedDetectionAbat800×gfor1min,thendilutethe100×ConcentratedBiotinylatedDetectionAbto1×workingsolutionwithBiotinylatedDetectionAbDiluent(ConcentratedBiotinylatedDetectionAb:BiotinylatedDetectionAbDiluent=1:99).
5.HRPConjugateworkingsolution:Calculatetherequiredamountbeforetheexperiment(100μL/well).Inpreparation,slightlymorethancalculatedshouldbeprepared.CentrifugetheConcentratedHRPConjugateat800×gfor1min,thendilutethe100×ConcentratedHRPConjugateto1×workingsolutionwithHRPConjugateDiluent(ConcentratedHRPConjugate:HRPConjugateDiluent=1:99). -18- Assayprocedure1.Determinewellsfordilutedstandard,blankandsample.Add100μLeachdilution ofstandard,blankandsampleintotheappropriatewells(Itismendedthatallsamplesandstandardsbeassayedinduplicate).Covertheplatewiththesealerprovidedinthekit.Incubatefor90minat37℃.Note:solutionsshouldbeaddedtothebottomofthemicroELISAplatewell,avoidtouchingtheinsidewallandcausingfoamingasmuchaspossible.2.Decanttheliquidfromeachwell,donotwash.Immediatelyadd100μLofBiotinylatedDetectionAbworkingsolutiontoeachwell.Covertheplatewithanewsealer.Incubatefor1hourat37°C.3.Decantthesolutionfromeachwell，add350μLofwashbuffertoeachwell.Soakfor1minandaspirateordecantthesolutionfromeachwellandpatitdryagainstcleanabsorbentpaper.Repeatthiswashstep3times.Note:amicroplatewashercanbeusedinthisstepandotherwashsteps.Makethetestedstripsinuseimmediatelyafterthewashstep.Donotallowwellstobedry.4.Add100μLofHRPConjugateworkingsolutiontoeachwell.Covertheplatewithanewsealer.Incubatefor30minat37°C.5.Decantthesolutionfromeachwell,repeatthewashprocessfor5timesasconductedinstep3.6.Add90μLofSubstrateReagenttoeachwell.Covertheplatewithanewsealer.Incubateforabout15minat37°
C.Protecttheplatefromlight.Note:thereactiontimecanbeshortenedorextendedordingtotheactualcolorchange,butnotmorethan30min.PreheattheMicroplateReaderforabout15minbeforeODmeasurement.7.Add50μLofSolutiontoeachwell.Note:addingthesolutionshouldbedoneinthesameorderasthesubstratesolution.8.Determinetheopticaldensity(ODvalue)ofeachwellatoncewithamicro-platereadersetto450nm. -19- AssayProcedureSummary -20- Calculationofresults Averagetheduplicatereadingsforeachstandardandsamples,thensubtracttheaveragezerostandardopticaldensity.Plotafourparameterlogisticcurveonlog-logaxis,withstandardconcentrationonthex-axisandODvaluesonthey-axis.IftheODofthesamplesurpassestheupperlimitofthestandardcurve,youshouldre-testitwithanappropriatedilution.Theactualconcentrationisthecalculatedconcentrationmultipliedbythedilutionfactor. Typicaldata AstheODvaluesofthestandardcurvemayvaryordingtotheconditionsoftheactualassayperformance(e.g.operator,pipettingtechnique,washingtechniqueortemperatureeffects),theoperatorshouldestablishastandardcurveforeachtest.Typicalstandardcurveanddataisprovidedbelowforreferenceonly. ng/mL OD CorrectedOD StandardCurve 25 2.45 2.393 10 8.33 1.59 1.533 OpticalDensity 2.78 0.882 0.825
1 0.93 0.5 0.443 0.31 0.261 0.204 0.1 0.1 0.178 0.121 0.03 0.126 0.069
0 0.057 - 0.01 0.01 0.1
1 10 100 Mouse
CRPconcentration(ng/mL) PerformancePrecision Intra-assayPrecision(Precisionwithinanassay):3sampleswithlow,midrangeandhighlevelMouseCRPweretested20timesononeplate,respectively.Inter-assayPrecision(Precisionbetweenassays):3sampleswithlow,midrangeandhighlevelMouseCRPweretestedon3differentplates,20replicatesineachplate,respectively. -21- SamplenMean(ng/mL)StandarddeviationCV(%) Intra-assayPrecision
1 2
3 20 20 20 0.2 0.92 5.83 0.01 0.05 0.19 6.14 4.9 3.29 Inter-assay
Precision
1 2
3 20 20 20 0.21 0.89 5.29 0.01 0.04 0.21 6.63 4.86 3.9 RecoveryTherecoveryofMouseCRPspikedatthreedifferentlevelsinsamplesthroughouttherangeoftheassaywasevaluatedinvariousmatrices. SampleType Range(%) AverageRecovery(%) Serum(n=8) 94-110 101 EDTAplasma(n=8) 87-102 94 Cellculturemedia(n=8)91-104 96 LinearitySampleswerespikedwithhighconcentrationsofMouseCRPanddilutedwithReferenceStandard&SampleDiluenttoproducesampleswithvalueswithintherangeoftheassay. Serum(n=5) EDTAplasma(n=5)Cellculturemedia(n=5) Range(%)87-1001:
2 Average(%)94 89-10396 88-10394 Range(%)82-981:
4 Average(%)89 89-10394 89-10296 Range(%)90-1031:
8 Average(%)96 92-10698 90-10095 Range(%)85-991:16 Average(%)92 90-10698 88-10193 -22- Troubleshooting Iftheresultsarenotgoodenough,pleasetakepicturesandsavetheexperimentaldataintime.Keeptheusedplateandremainingreagents.Thencontactourtechnicalsupporttosolvetheproblem.Meanwhile,youcouldalsorefertothefollowingmateria ProblemPoorstandardcurve Lowsignal DeepcolorbutlowvalueLargeCV Highbackground Lowsensitivity Causes uratepipetting Improperstandard dilution Wellsarenot completelyaspirated Insufficient incubationtime Incorrect assay temperature Inadequatereagent volumes Improperdilution HRP conjugate inactiveorTMB failure Platereadersettingisnotoptimal uratepipettingConcentrationoftargetproteinistoohighPlateisinsufficientlywashedContaminatedwashbufferImproperstorageoftheELISAkitsolutionisnotadded SolutionsCheckpipettes.Ensurebrieflyspinthevialofstandardanddissolvethepowderthoroughlybygentlemixing.Completelyaspiratewellsinbetweensteps. Ensuresufficientincubationtime.Usemendedincubationtemperature.Bringsubstratetoroomtemperaturebeforeuse. Checkpipettesandensurecorrectpreparation. MixHRPconjugateandTMB,rapidcoloring. VerifythewavelengthandfiltersettingontheMicroplatereader.OpentheMicroplateReaderaheadtopre-heat.Checkpipettes. Usemendeddilutionfactor. Reviewthemanualforproperwash.Ifusingaplatewasher,checkthatallportsareunobstructed.Preparefreshwashbuffer.Allthereagentsshouldbestoredordingtotheinstructions.solutionshouldbeaddedtoeachwellbeforemeasurement. -23- Declaration
1.Limitedbycurrentconditionsandscientifictechnology,wecan'tprehensiveidentificationandanalysisonalltherawmaterialprovided.Sotheremightbesomequalitativeandtechnicalrisksforusersusingthekit.
2.Thisassayisdesignedtoeliminateinterferencebyfactorspresentinbiologicalsamples.UntilallfactorshavebeentestedintheELISAimmunoassay,thepossibilityofinterferencecannotbeexcluded.
3.Thefinalexperimentalresultswillbecloselyrelatedtothevalidityofproducts,operationalskillsoftheoperators,theexperimentalenvironmentsandsoon.Weareonlyresponsibleforthekititself,butnotforthesamplesconsumedduringtheassay.Theusersshouldcalculatethepossibleamountofthesamplesusedinthewholetest.Pleasereservesufficientsamplesinadvance.
4.Togetthebestresults,pleaseonlyusethereagentssuppliedbythemanufacturerandplywiththeinstructions.
5.Incorrectresultsmayurbecauseofincorrectoperationsduringthereagentspreparationandloading,aswellasincorrectparametersettingsoftheMicro-platereader.Pleasereadtheinstructionscarefullyandadjusttheinstrumentpriortotheexperiment.
6.Eventhesameoperatormightgetdifferentresultsintwoseparateexperiments.Inordertogetreproducibleresults,theoperationofeverystepintheassayshouldbecontrolled.
7.EverykithasstrictlypassedQCtest.However,resultsfromendusersmightbeinconsistentwithourdataduetosomevariablessuchastransportationconditions,differentlabequipment,andsoon.Intra-assayvarianceamongkitsfromdifferentbatchesmightarisefromtheabovereasonstoo.
8.Kitsfromdifferentmanufacturersorothermethodsfortestingthesameanalytecouldbringoutinconsistentresults,sincewehaven’paredourproductswiththosefromothermanufacturers.
9.Thekitisdesignedforresearchuseonly,wewillnotberesponsibleforanyissuesifthekitisappliedinclinicaldiagnosisoranyotherrelatedprocedures. -24-
5 Elabscience®小鼠C反应蛋白(CRP)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书 MouseCRP(C-ReactiveProtein)ELISAKit 使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们： 销售部电话技术部电话电子邮箱（销售）电子邮箱（技术）网址 027-65022280，027-87854967027-87526315Perry@techsupport@ 具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。
-1- 用途该试剂盒用于体外定量检测小鼠血清、血浆或其它相关生物液体中CRP浓度。
基本性能 性能灵敏度检测范围特异性重复性 0.02ng/mL0.03-25ng/mL可检测样本中的小鼠CRP，且与其它类似物无明显交叉反应板内，板间变异系数均<10% 检测原理 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。
用抗小鼠CRP抗体包被于酶标板上，实验时样品（或标准品）中的小鼠CRP会与包被抗体结合。
后依次加入生物素化的抗小鼠CRP抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素，抗小鼠CRP抗体与结合在包被抗体上的小鼠CRP结合，生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。
加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。
用酶标仪在450nm波长处测OD值，CRP浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中CRP的浓度。
-2- 试剂盒组成及保存 未拆封的试剂盒可在2-8℃保存一周；如果一周以后才使用试剂盒，请拆开试剂盒并按照下表中的条件分别保存各组分。
中文名称 规格 开封后保存条件 96T：8孔×12条 ELISA酶标板 48T：8孔×6条 MicroELISAPlate 24T：8孔×3条 96T*5：5块96T酶标板 冻干标准品ReferenceStandard 96T：2支48T/24T：1支96T*5：10支 -20℃,可存放6个月 浓缩生物素化抗体(100×) 96T：1支120μ
L ConcentratedBiotinylatedDetection48T/24T：1支60μ
L Ab(100×) 96T*5：5支120μ
L 浓缩HRP酶结合物（100×）ConcentratedHRPConjugate（100×） 96T：1支120μL48T/24T：1支60μL96T*5：5支120μ
L -20℃(避光)可存放6个月 标准品&样品稀释液 96T/48T/24T：1瓶20mL ReferenceStandard&SampleDiluent96T*5：5瓶20mL 生物素化抗体稀释液 96T/48T/24T：1瓶14mL BiotinylatedDetectionAbDiluent酶结合物稀释液 96T*5：5瓶14mL96T/48T/24T：1瓶14mL 2-8℃,可存放6个月 HRPConjugateDiluent 96T*5：5瓶14mL 浓缩洗涤液(25×) 96T/48T/24T：1瓶30mL ConcentratedWashBuffer(25×) 96T*5：5瓶30mL 底物溶液(TMB)SubstrateReagent 96T/48T/24T：1瓶10mL96T*5：5瓶10mL 2-8℃(避光) 反应终止液Solution 96T/48T/24T：1瓶10mL96T*5：5瓶10mL 2-8℃ 封板覆膜 96T/48T/24T：5张 PlateSealer 96T*5：25张 产品说明书Manual 1份 质检报告CertificateofAnalysis 1份 说明：所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。
试剂体积以实际发货版说明书为准。
相关试剂在分装时会比标签上 标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出。
-3- 试验所需自备物品
1.酶标仪(450nm波长滤光片)
2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL,2-20μL,20-200μL,200-1000μL3.37℃恒温箱，
4.双蒸水或去离子水
5.吸水纸
6.加样槽 样品收集方法(具体处理方法可参考官网：)
1.血清：全血样品于室温放置1小时或2-8℃过夜后于2-8℃，1000×g离心20分钟，取上清即可检测。
2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于2-8℃，1000×g离心15分钟，取上清即可检测。
3.组织匀浆：用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。
为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。
最后将匀浆液于2-8℃，5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
4.细胞提取液：贴壁细胞用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。
收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。
每106个细胞中加入150-200μLPBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。
将提取液于2-8℃，1500×g离心10分钟，取上清检测。
5.细胞培养上清或其他生物体液：收集液体后于2-8℃，1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。
取上清检测。
注意事项试剂盒注意事项1)本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断。
2)试验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。
特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。
3)刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按照上述表格中保存条件存放。
4)请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。
未用完的浓缩生物素化抗体(100×)、浓缩HRP酶结合物(100×)、酶 -4- 标板及其他原液按照上述表格中保存条件存放。
5)检测使用的酶标仪需要安装能检测450±10nm波长的滤光片，光密度范 围在0-3.5之间。
建议使用时提前15分钟预热。
6)请勿使用其他批号或其他来源的试剂混合或替代本试剂盒中的试剂。
7)试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用。
8)请勿使用过期的试剂。
样品注意事项1)收集血液的试管应为一次性无内毒素试管。
避免使用溶血，高血脂样品。
2)样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃，若不能及时检测，请按 一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃(3个月内检测)，避免反复冻融。
在检测前，冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物。
室温混匀后使用。
3)试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围，建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本的实际浓度情况。
如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。
4)若所检样本不在说明书所列样本之中，建议做预实验验证其检测有效性。
5)若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液，由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。
6)某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。
样本稀释方案请提前预估样本的浓度范围，如果您的检测样本需要稀释，参考稀释方案如下： 稀释100倍：一步稀释。
取5μL样本到495μL标准品&样本稀释液内，做100倍稀释；稀释1000倍：两步稀释。
取5μL样本到95μL标准品&样本稀释液内，做20倍稀释，再取5μL20倍稀释样本到245μL标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释1000倍；稀释100000倍：三步稀释。
取5μL样本到195μL标准品&样本稀释液内，做40倍稀释，再取5μL40倍稀释样本到245μL标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，最后取5μL2000倍稀释样本到245μL标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释100000倍；每步稀释时取液量不少于3μ
L，稀释倍数不超过100倍。
每步稀释都需混合均匀，避免起泡。
-5- 检测前准备工作
1.提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温(18-25℃)。
如果试剂盒需分 多次使用，请仅取出本次实验所需的酶标板条和试剂，剩余板条和试剂需 按照指定条件保存。
2.洗涤液：将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:24)。
提示：从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液。
当日使用。
3.标准品工作液：将标准品于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，轻轻混匀，避免起泡，配成25ng/mL的标准品工作液(或加入1mL标准品&样品稀释液后，静置1-2分钟，用低速涡旋仪充分混匀。
可通过低速离心去除涡旋过程中产生的气泡)。
然后根据需要进行倍比稀释。
建议配制成以下浓度：25、8.33、2.78、0.93、0.31、0.1、0.03、0ng/mL。
倍比稀释方法：取7支EP管，每管中加入600μL标准品&样品稀释液,从25ng/mL的标准品工作液中吸取300μL到第一支EP管中混匀配成8.33ng/mL的标准品工作液，按此步骤往后依次吸取混匀。
如下图。
提示：最后一管直 接作为空白孔，不需要再从倒数第二管中吸取液体。
25 8.33 2.78 0.93 0.31 0.1 0.03
0 4.生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量(以100
μL/孔计算)，实际配制时应多配制100-200μ
L。
使用前15分钟，将浓缩生物素化抗体于800×g离心1分钟，以生物素化抗体稀释液将100×浓缩生物素化抗体稀释成1×工作浓度(例如：10μL浓缩液+990μL稀释液)。
5.酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计算)，实际配制时应多配制100-200μ
L。
使用前15分钟，将浓缩HRP酶结合物于800×g离心1分钟，以酶结合物稀释液将100×浓缩HRP酶结合物稀释成1×工作浓度(例如：10μL浓缩液+990μL稀释液)。
-6- 操作步骤
1.分别设定标准孔、空白孔和样本孔。
标准孔加入100μL倍比稀释的标准品， 空白孔加入100μL标准品&样本稀释液，其余孔加入100μL待测样本(建议所有的待检样本和标准品在检测中设立复孔)。
给酶标板覆膜，37℃孵育90分钟。
提示：加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，避免产生气泡。
加样时间宜控制在10分钟内。
2.甩尽孔内液体，不用洗涤。
每个孔中加入生物素化抗体工作液100μ
L，酶标板加上覆膜，37℃温育1小时。
3.甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干。
每孔加洗涤液350μ
L，浸泡1分钟，吸去或甩掉酶标板内的液体，拍干。
重复此洗板步骤3次。
提示：此处与其他洗板步骤都可使用洗板机(参考北京拓普DEM-3型洗板机参数设置：2点吸，每孔加入洗涤液350μ
L，振板5秒，吸液0.5秒)。
洗板完成后请立即进行下步操作，不要让微孔板干燥。
4.每孔加酶结合物工作液100μ
L，酶标板加上覆膜，37℃温育30分钟。
5.甩尽孔内液体，洗板5次，方法同步骤
3。
6.每孔加底物溶液(TMB)90μ
L，酶标板加上覆膜，37℃避光孵育15分钟左右。
提示：根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过30分钟。
当标准孔出现明显梯度时(前4个显色孔出现明显蓝色梯度)，即可终止。
提前15分钟打开酶标仪预热。
7.每孔加终止液50μ
L，终止反应。
提示：终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。
8.立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(OD值)。
-7- 操作一览表 -8- 结果判断
1.计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。
以 浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在双对数坐标轴上拟合四参数逻辑函数的标准曲线，操作详情请参阅“Elabscience”官网/微信公众号内技术文章(作图时去掉空白组的值)。
2.若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
典型数据以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
ng/mL OD 校正OD 标曲 25 2.45 2.393 10 8.33 1.59 1.533 OpticalDensity 2.780.8820.8251 0.93 0.5 0.443 0.31 0.261 0.204 0.1 0.1 0.178 0.121 0.03 0.126 0.069
0 0.057 - 0.01 0.01 0.1
1 10 100 Mouse
CRPconcentration(ng/mL) 性能精密度板内精密度：低，中，高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度：低，中，高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
批内变异系数 批间变异系数 样本
1 2
3 1
2 3 数量 20 20 20 20 20 20 平均值(ng/mL) 0.2 0.92 5.83 0.21 0.89 5.29 标准差 0.01 0.05 0.19 0.01 0.04 0.21 变异系数
(%) 6.14 4.9 3.29 6.63 4.86 3.9 -9- 回收率分别往不同样本中添加已知浓度的小鼠CRP，做回收实验，得出回收率范围和平均回收率。
样本类型 回收率范围(%) 平均回收率(%) 血清(n=8) 94-110 101 血浆(EDTA)(n=8) 87-102 94 细胞培养基(n=8) 91-104 96 线性将添加有小鼠CRP的样本分别稀释2倍，4倍，8倍，16倍做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。
血清(n=5) 回收率范围(%)87-1001:
2 平均回收率(%)94 回收率范围(%)82-981:
4 平均回收率(%)89 回收率范围(%)90-1031:
8 平均回收率(%)96 回收率范围(%)85-991:16 平均回收率(%)92 血浆(EDTA)(n=5)89-1039689-1039492-1069890-10698 细胞培养基(n=5)88-1039489-1029690-1009588-10193 -10- 问题分析若实验效果不好，请及时对显色结果拍照，保存实验数据，保留所用板条及未使用试剂，然后联系我公司技术支持为您解决问题。
同时您也可以参考以下资料： 问题描述 可能原因吸液或加液不准 相应对策检查移液器及吸头 标准曲线梯度差 标准品稀释不正确 洗涤不完全孵育时间太短 溶解标准品时稍微旋转瓶身，轻轻混匀使粉末完全溶解 保证洗涤时间和洗涤次数及每孔的加液量保证充足的孵育时间 实验温度不正确 使用推荐的实验温度 显色很弱或无色 试剂体积不够或漏加稀释不正确 检查吸液及加液过程，保证所有试剂按顺序足量添加 酶标记物失活或底物失效 混合酶结合物和底物，通过迅速显色来检查判断 读数数值低酶标仪设置不正确 在酶标仪上检查波长及滤光片设置提前打开酶标仪预热 变异系数大背景值高 加液不正确检测抗体的工作浓度过高 酶标板洗涤不完全 检查加液情况 使用推荐的稀释倍数 保证每步清洗完全；如果用自动洗板机，请检查所有的出口是否有堵塞；是否使用试剂盒配备的洗涤液 灵敏度低 洗液有污染ELISA试剂盒保存不当读数前未终止 配制新鲜的洗液按说明书要求保存相关试剂OD读数前应在每孔中加入终止液 -11- 声明
1.限于现有条件及科学技术水平，尚不能对所有原料进行全面的鉴定分析， 本产品可能存在一定的质量技术风险。
2.本试剂盒在研发过程中去除/降低了生物学样本中的一些内源性干扰因素， 并非所有可能影响的因素均已去除。
3.最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境 等因素密切相关，本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本可能的使用量，预留充足的样本。
4.为了达到好的实验结果，请只使用本公司试剂盒内提供的试剂，不要混用其他制造商的产品，严格按照说明书操作。
5.由于操作过程中试剂制备以及酶标仪参数设置不正确，可能导致结果异常，实验前请仔细阅读说明书并调整好仪器。
6.即使是相同人员操作也可能在两次独立实验中得到不同的结果，为保证结果的重现性，需要控制实验过程中每一步的操作。
7.试剂盒发货前会经过严格的质检，然而，因为运输条件、实验设备差异等等因素影响，用户检测结果可能跟出厂数据不一致。
不同批次间试剂盒间的差异也可能来自上述原因。
8.本试剂盒未与其他厂家同类试剂盒或不同方法检测同一目的物的产品进行对比，所以不排除检测结果不一致的情况。
9.试剂盒仅供研究使用，如将其用于临床诊断或任何其他用途，我公司将不对因此产生的问题负责，亦不承担任何法律责任。
-12- MouseCRP(C-ReactiveProtein)ELISAKit CatalogNo:E-EL-M0053cSize:96T/48T/24T/96T*
5 Intendeduse ThisELISAkitappliestotheinvitroquantitativedeterminationofMouseCRPconcentrationsinserum,plasmaandotherbiologicalfluids. Character ItemSensitivityDetectionRange Specificity Repeatability 0.02ng/mL 0.03-25ng/mLThiskitrecognizesMouseCRPinsamples.NosignificantcrossreactivityorinterferencebetweenMouseCRPandanalogueswasobservedCoefficientofvariationis<10% Testprinciple ThisELISAkitusestheSandwich-ELISAprinciple.ThemicroELISAplateprovidedinthiskithasbeenpre-coatedwithanantibodyspecifictoMouseCRP.Samples(orStandards)areaddedtothemicroELISAplatewellsbinedwiththespecificantibody.ThenabiotinylateddetectionantibodyspecificforMouseCRPandAvidinHorseradishPeroxidase(HRP)conjugateareaddedessivelytoeachmicroplatewellandincubated.ponentsarewashedaway.Thesubstratesolutionisaddedtoeachwell.OnlythosewellsthatcontainMouseCRP,biotinylateddetectionantibodyandAvidin-HRPconjugatewillappearblueincolor.Theenzyme-substratereactionisterminatedbytheadditionofsolutionandthecolorturnsyellow.Theopticaldensity(OD)ismeasuredspectrophotometricallyatawavelengthof450±2nm.TheODvalueisproportionaltotheconcentrationofMouseCRP.YoucancalculatetheconcentrationofMouseCRPinthesamplesparingtheODofthesamplestothestandardcurve. -13- ponents&Storage Anunopenedkitcanbestoredat2-8℃for1week.Ifthekitisnotsupposedtobeusedwithin1week,storetheitemsseparatelyordingtothefollowingconditionsoncethekitisreceived. Item Specifications Storage MicroELISAPlate(Dismountable) ReferenceStandard 96T:8wells×12strips48T:8wells×6strips24T:8wells×3strips96T*5:5plates,96T 96T:2vials48T/24T:1vial96T*5:10vials -20℃,6months ConcentratedBiotinylatedDetectionAb(100×) ConcentratedHRPConjugate(100×) ReferenceStandard&SampleDiluent 96T:1vial,120μL48T/24T:1vial,60μL96T*5:5vials,120μL 96T:1vial,120μL48T/24T:1vial,60μL96T*5:5vials,120μL 96T/48T/24T:1vial,20mL96T*5:5vials,20mL -20℃(Protectfromlight),6months BiotinylatedDetectionAbDiluent HRPConjugateDiluent 96T/48T/24T:1vial,14mL96T*5:5vials,14mL 96T/48T/24T:1vial,14mL96T*5:5vials,14mL 2-8℃,6months ConcentratedWashBuffer(25×) 96T/48T/24T:1vial,30mL96T*5:5vials,30mL SubstrateReagent 96T/48T/24T:1vial,10mL96T*5:5vials,10mL 2-8℃(Protectfromlight) Solution 96T/48T/24T:1vial,10mL96T*5:5vials,10mL 2-8℃ PlateSealer 96T/48T/24T:5pieces96T*5:25pieces ProductDescription 1copy CertificateofAnalysis 1copy Note:Allreagentbottlecapsmustbetightenedtopreventevaporationandmicrobialpollution.Thevolumeofreagentsinpartialshipmentsisalittlemorethanthevolumemarkedonthelabel,pleaseuseuratemeasuringequipmentinsteadofdirectlypouringintothevial(s). -14- Othersuppliesrequired Microplatereaderwith450nmwavelengthfilterHigh-precisiontransferpipette,EPtubesanddisposablepipettetipsIncubatorcapableofmaintaining37℃DeionizedordistilledwaterAbsorbentpaperLoadingslot Samplecollection (Moredetailedinformationpleaseviewourwebsite:/List–detail-241.html)Serum:Allowsamplestoclotfor1houratroomtemperatureorovernightat2-8℃beforecentrifugationfor20minat1000×gat2-8℃.Collectthesupernatanttocarryouttheassay.Plasma:CollectplasmausingEDTA-Na2asananticoagulant.Centrifugesamplesfor15minat1000×gat2-8℃within30minofcollection.Collectthesupernatanttocarryouttheassay.Tissuehomogenates:Itismendedtogetdetailedreferencesfromtheliteraturebeforeanalyzingdifferenttissuetypes.Forgeneralinformation,hemolyzedbloodmayaffecttheresults,sothetissuesshouldbemincedintosmallpiecesandrinsedinice-coldPBS(0.01M,pH=7.4)toremoveexcessbloodthoroughly.TissuepiecesshouldbeweighedandthenhomogenizedinPBS(tissueweight(g):PBS(mL)volume=1:9)withaglasshomogenizeronice.Tofurtherbreakdownthecells,youcansonicatethesuspensionwithanultrasoniccelldisrupterorsubjectittofreeze-thawcycles.Thehomogenatesarethencentrifugedfor5-10minat5000×gat2-8℃togetthesupernatant.Celllysates:Foradherentcells,gentlywashthecellswithmoderateamountofpre-cooledPBSanddissociatethecellsusingtrypsin.Collectthecellsuspensionintoacentrifugetubeandcentrifugefor5minat1000×g.Discardthemediumandwashthecells3timeswithpre-cooledPBS.Foreach1×106cells,add150-250μLofpre-cooledPBStokeepthecellssuspended.Repeatthefreeze-thawprocessseveraltimesoruseanultrasoniccelldisrupteruntilthecellsarefullylysed.Centrifugefor10minat1500×gat2-8℃.Removethecellfragments,collectthesupernatanttocarryouttheassay.Cellculturesupernatantorotherbiologicalfluids:Centrifugesamplesfor20minat1000×gat2-8℃.Collectthesupernatanttocarryouttheassay. -15- Note 1)2) 3) 4) 5) 6)7)8) NoteforkitForresearchuseonly.Notforuseindiagnosticprocedures.Pleasewearlabcoats,eyeprotectionandlatexglovesforprotection.Pleaseperformtheexperimentfollowingthenationalsecurityprotocolsofbiologicallaboratories,especiallywhendetectingbloodsamplesorotherbodilyfluids.AfreshlyopenedELISAplatemayappearawater-likesubstance,whichisnormalandwillnothaveanyimpactontheexperimentalresults.Returntheunusedwellstothefoilpouchandstoreordingtotheconditionssuggestedintheabovetable.Donotreusethereconstitutedstandard,biotinylateddetectionAbworkingsolution,concentratedHRPconjugateworkingsolution.TheunspentundilutedconcentratedbiotinylateddetectionAb(100×)andotherstocksolutionsshouldbestoredordingtothestorageconditionsintheabovetable.Themicroplatereadershouldbeabletobeinstalledwithafilterthatcandetectthewavelengthat450±10nm.Theopticaldensityshouldbewithin0-3.5.FollowtheInstructionsoftheMicroplateReaderforset-upandpreheatitfor15minbeforeODmeasurement.Donotmixorsubstitutereagentswiththosefromotherlotsorsources.Changepipettetipsinbetweenaddingofeachstandardlevel,betweensampleaddingandbetweenreagentadding.Also,useseparatereservoirsforeachreagent.Thekitshouldnotbeusedbeyondtheexpirationdateonthekitlabel. Noteforsample1)Tubesforbloodcollectionshouldbedisposableandbenon-endotoxin.Samples withhighhemolysisormuchlipidarenotsuitableforELISAassay.2)Samplesshouldbeassayedwithin7dayswhenstoredat2-8℃,otherwisesamples mustbedividedupandstoredat-20℃(≤1month)or-80℃(≤3months).Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.Priortoassay,thefrozensamplesshouldbeslowlythawedandcentrifugedtoremoveprecipitates.3)Pleasepredicttheconcentrationbeforeassaying.Ifthesampleconcentrationisnotwithintherangeofthestandardcurve,usersmustdeterminetheoptimalsampledilutionsfortheirparticularexperiments.4)Ifthesampletypeisnotincludedinthemanual,apreliminaryexperimentissuggestedtoverifythevalidity.5)Ifalysisbufferisusedtopreparetissuehomogenatesorcelllysates,thereisapossibilityofcausingadeviationduetotheintroducedchemicalsubstance.6)Somebinantproteinmaynotbedetectedduetoamismatchingwiththecoatedantibodyordetectionantibody. -16- DilutionMethod Pleasepredicttheconcentrationrangeofthesampleinadvance.Ifyourtestsampleneedsdilution,pleaserefertothedilutionmethodasfollows:For100folddilution:One-stepdilution.Add5μLsampleto495μLsamplediluenttoyield100folddilution.For1000folddilution:Two-stepdilution.Add5μLsampleto95μLsamplediluenttoyield20folddilution,thenadd5μL20folddilutedsampleto245μLsamplediluent,afterthis,theneatsamplehasbeendilutedat1000foldessfully.For100000folddilution:Three-stepdilution.Add5μLsampleto195μLsamplediluenttoyield40folddilution,thenadd5μL40folddilutedsampleto245μLsamplediluenttoyield50folddilution,andfinallyadd5μL2000folddilutedsampleto245μLsamplediluent,afterthis,theneatsamplehasbeendilutedat100000foldessfully. Reagentpreparation
1.Bringallreagentstoroomtemperature(18-25℃)beforeuse.Ifthekitwillnotbeusedupinoneassay,pleaseonlytakeoutthenecessarystripsandreagentsforpresentexperiment,andstoretheremainingstripsandreagentsatrequiredcondition.
2.WashBuffer:Dilute30mLofConcentratedWashBufferwith720mLofdeionizedordistilledwatertoprepare750mLofWashBuffer.Note:ifcrystalshaveformedintheconcentrate,warmitina40℃waterbathandmixitgentlyuntilthecrystalspletelydissolved.
3.Standardworkingsolution:Centrifugethestandardat10,000×gfor1min.Add1mLofReferenceStandard&SampleDiluent,letitstandfor10minandinvertitgentlyseveraltimes.Afteritdissolvesfully,mixitthoroughlywithapipette.Thisreconstitutionproducesaworkingsolutionof25ng/mL(oradd1mLofReferenceStandard&SampleDiluent,letitstandfor1-2minandthenmixitthoroughlywithavortexmeteroflowspeed.Bubblesgeneratedduringvortexcouldberemovedbycentrifugingatarelativelylowspeed).Thenmakeserialdilutionsasneeded.Themendeddilutiongradientisasfollows:25,8.33,2.78,0.93,0.31,0.1,0.03,0ng/mL.Dilutionmethod:Take7EPtubes,add600μLofReferenceStandard&SampleDiluenttoeachtube.Pipette300μLofthe25ng/mLworkingsolutiontothefirsttubeandmixuptoproducea8.33ng/mLworkingsolution.Pipette300μLofthesolutionfromtheformertubeintothelatteroneordingtothisstep.Theillustrationbelowisforreference.Note:thelasttubeisregardedasablank.Don’tpipettesolutionintoitfromtheformertube.(Theoperationdiagramisshownonthenextpage) -17- 25 8.33 2.78 0.93 0.31 0.1 0.03
0 4.BiotinylatedDetectionAbworkingsolution:Calculatetherequiredamountbeforetheexperiment(100μL/well).Inpreparation,slightlymorethancalculatedshouldbeprepared.CentrifugetheConcentratedBiotinylatedDetectionAbat800×gfor1min,thendilutethe100×ConcentratedBiotinylatedDetectionAbto1×workingsolutionwithBiotinylatedDetectionAbDiluent(ConcentratedBiotinylatedDetectionAb:BiotinylatedDetectionAbDiluent=1:99).
5.HRPConjugateworkingsolution:Calculatetherequiredamountbeforetheexperiment(100μL/well).Inpreparation,slightlymorethancalculatedshouldbeprepared.CentrifugetheConcentratedHRPConjugateat800×gfor1min,thendilutethe100×ConcentratedHRPConjugateto1×workingsolutionwithHRPConjugateDiluent(ConcentratedHRPConjugate:HRPConjugateDiluent=1:99). -18- Assayprocedure1.Determinewellsfordilutedstandard,blankandsample.Add100μLeachdilution ofstandard,blankandsampleintotheappropriatewells(Itismendedthatallsamplesandstandardsbeassayedinduplicate).Covertheplatewiththesealerprovidedinthekit.Incubatefor90minat37℃.Note:solutionsshouldbeaddedtothebottomofthemicroELISAplatewell,avoidtouchingtheinsidewallandcausingfoamingasmuchaspossible.2.Decanttheliquidfromeachwell,donotwash.Immediatelyadd100μLofBiotinylatedDetectionAbworkingsolutiontoeachwell.Covertheplatewithanewsealer.Incubatefor1hourat37°C.3.Decantthesolutionfromeachwell，add350μLofwashbuffertoeachwell.Soakfor1minandaspirateordecantthesolutionfromeachwellandpatitdryagainstcleanabsorbentpaper.Repeatthiswashstep3times.Note:amicroplatewashercanbeusedinthisstepandotherwashsteps.Makethetestedstripsinuseimmediatelyafterthewashstep.Donotallowwellstobedry.4.Add100μLofHRPConjugateworkingsolutiontoeachwell.Covertheplatewithanewsealer.Incubatefor30minat37°C.5.Decantthesolutionfromeachwell,repeatthewashprocessfor5timesasconductedinstep3.6.Add90μLofSubstrateReagenttoeachwell.Covertheplatewithanewsealer.Incubateforabout15minat37°
C.Protecttheplatefromlight.Note:thereactiontimecanbeshortenedorextendedordingtotheactualcolorchange,butnotmorethan30min.PreheattheMicroplateReaderforabout15minbeforeODmeasurement.7.Add50μLofSolutiontoeachwell.Note:addingthesolutionshouldbedoneinthesameorderasthesubstratesolution.8.Determinetheopticaldensity(ODvalue)ofeachwellatoncewithamicro-platereadersetto450nm. -19- AssayProcedureSummary -20- Calculationofresults Averagetheduplicatereadingsforeachstandardandsamples,thensubtracttheaveragezerostandardopticaldensity.Plotafourparameterlogisticcurveonlog-logaxis,withstandardconcentrationonthex-axisandODvaluesonthey-axis.IftheODofthesamplesurpassestheupperlimitofthestandardcurve,youshouldre-testitwithanappropriatedilution.Theactualconcentrationisthecalculatedconcentrationmultipliedbythedilutionfactor. Typicaldata AstheODvaluesofthestandardcurvemayvaryordingtotheconditionsoftheactualassayperformance(e.g.operator,pipettingtechnique,washingtechniqueortemperatureeffects),theoperatorshouldestablishastandardcurveforeachtest.Typicalstandardcurveanddataisprovidedbelowforreferenceonly. ng/mL OD CorrectedOD StandardCurve 25 2.45 2.393 10 8.33 1.59 1.533 OpticalDensity 2.78 0.882 0.825
1 0.93 0.5 0.443 0.31 0.261 0.204 0.1 0.1 0.178 0.121 0.03 0.126 0.069
0 0.057 - 0.01 0.01 0.1
1 10 100 Mouse
CRPconcentration(ng/mL) PerformancePrecision Intra-assayPrecision(Precisionwithinanassay):3sampleswithlow,midrangeandhighlevelMouseCRPweretested20timesononeplate,respectively.Inter-assayPrecision(Precisionbetweenassays):3sampleswithlow,midrangeandhighlevelMouseCRPweretestedon3differentplates,20replicatesineachplate,respectively. -21- SamplenMean(ng/mL)StandarddeviationCV(%) Intra-assayPrecision
1 2
3 20 20 20 0.2 0.92 5.83 0.01 0.05 0.19 6.14 4.9 3.29 Inter-assay
Precision
1 2
3 20 20 20 0.21 0.89 5.29 0.01 0.04 0.21 6.63 4.86 3.9 RecoveryTherecoveryofMouseCRPspikedatthreedifferentlevelsinsamplesthroughouttherangeoftheassaywasevaluatedinvariousmatrices. SampleType Range(%) AverageRecovery(%) Serum(n=8) 94-110 101 EDTAplasma(n=8) 87-102 94 Cellculturemedia(n=8)91-104 96 LinearitySampleswerespikedwithhighconcentrationsofMouseCRPanddilutedwithReferenceStandard&SampleDiluenttoproducesampleswithvalueswithintherangeoftheassay. Serum(n=5) EDTAplasma(n=5)Cellculturemedia(n=5) Range(%)87-1001:
2 Average(%)94 89-10396 88-10394 Range(%)82-981:
4 Average(%)89 89-10394 89-10296 Range(%)90-1031:
8 Average(%)96 92-10698 90-10095 Range(%)85-991:16 Average(%)92 90-10698 88-10193 -22- Troubleshooting Iftheresultsarenotgoodenough,pleasetakepicturesandsavetheexperimentaldataintime.Keeptheusedplateandremainingreagents.Thencontactourtechnicalsupporttosolvetheproblem.Meanwhile,youcouldalsorefertothefollowingmateria ProblemPoorstandardcurve Lowsignal DeepcolorbutlowvalueLargeCV Highbackground Lowsensitivity Causes uratepipetting Improperstandard dilution Wellsarenot completelyaspirated Insufficient incubationtime Incorrect assay temperature Inadequatereagent volumes Improperdilution HRP conjugate inactiveorTMB failure Platereadersettingisnotoptimal uratepipettingConcentrationoftargetproteinistoohighPlateisinsufficientlywashedContaminatedwashbufferImproperstorageoftheELISAkitsolutionisnotadded SolutionsCheckpipettes.Ensurebrieflyspinthevialofstandardanddissolvethepowderthoroughlybygentlemixing.Completelyaspiratewellsinbetweensteps. Ensuresufficientincubationtime.Usemendedincubationtemperature.Bringsubstratetoroomtemperaturebeforeuse. Checkpipettesandensurecorrectpreparation. MixHRPconjugateandTMB,rapidcoloring. VerifythewavelengthandfiltersettingontheMicroplatereader.OpentheMicroplateReaderaheadtopre-heat.Checkpipettes. Usemendeddilutionfactor. Reviewthemanualforproperwash.Ifusingaplatewasher,checkthatallportsareunobstructed.Preparefreshwashbuffer.Allthereagentsshouldbestoredordingtotheinstructions.solutionshouldbeaddedtoeachwellbeforemeasurement. -23- Declaration
1.Limitedbycurrentconditionsandscientifictechnology,wecan'tprehensiveidentificationandanalysisonalltherawmaterialprovided.Sotheremightbesomequalitativeandtechnicalrisksforusersusingthekit.
2.Thisassayisdesignedtoeliminateinterferencebyfactorspresentinbiologicalsamples.UntilallfactorshavebeentestedintheELISAimmunoassay,thepossibilityofinterferencecannotbeexcluded.
3.Thefinalexperimentalresultswillbecloselyrelatedtothevalidityofproducts,operationalskillsoftheoperators,theexperimentalenvironmentsandsoon.Weareonlyresponsibleforthekititself,butnotforthesamplesconsumedduringtheassay.Theusersshouldcalculatethepossibleamountofthesamplesusedinthewholetest.Pleasereservesufficientsamplesinadvance.
4.Togetthebestresults,pleaseonlyusethereagentssuppliedbythemanufacturerandplywiththeinstructions.
5.Incorrectresultsmayurbecauseofincorrectoperationsduringthereagentspreparationandloading,aswellasincorrectparametersettingsoftheMicro-platereader.Pleasereadtheinstructionscarefullyandadjusttheinstrumentpriortotheexperiment.
6.Eventhesameoperatormightgetdifferentresultsintwoseparateexperiments.Inordertogetreproducibleresults,theoperationofeverystepintheassayshouldbecontrolled.
7.EverykithasstrictlypassedQCtest.However,resultsfromendusersmightbeinconsistentwithourdataduetosomevariablessuchastransportationconditions,differentlabequipment,andsoon.Intra-assayvarianceamongkitsfromdifferentbatchesmightarisefromtheabovereasonstoo.
8.Kitsfromdifferentmanufacturersorothermethodsfortestingthesameanalytecouldbringoutinconsistentresults,sincewehaven’paredourproductswiththosefromothermanufacturers.
9.Thekitisdesignedforresearchuseonly,wewillnotberesponsibleforanyissuesifthekitisappliedinclinicaldiagnosisoranyotherrelatedprocedures. -24-
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