所回收DNA的质量已通过以下方法得到检测，包括分光光度检测、琼脂糖凝胶电泳检测、运用ThermoScientific快速限制性内切酶检测以及自动测序检测。
质量授权人： Jurgita
Zilinskiene 目录 页码 试剂盒组成................................................................................................................................
2储存和稳定性............................................................................................................................
2产品介绍....................................................................................................................................
2基本原理....................................................................................................................................
3重要提示....................................................................................................................................
3所需额外试剂和仪器................................................................................................................
3纯化方案....................................................................................................................................
4问题解决方案............................................................................................................................
6安全信息....................................................................................................................................
8参考文献....................................................................................................................................
8 试剂盒组成 GeneJET胶回收试剂盒 结合液漂洗液（浓缩）洗脱液（10mMTris-HCl，PH8.5）GeneJET回收柱（预装入收集管） 50preps#K069130ml9ml15ml50 250preps#K0692150ml45ml30ml250 储存和稳定性 ThermoScientificGeneJET胶回收试剂盒室温下（15-20℃）可储存12个月，在4℃条件下可储存12个月以上。
若储存过程中缓冲液出现沉淀，在使用前需在37°C条件下进行再溶。
产品介绍 ThermoScientificGeneJET胶回收试剂盒旨在从经TAE或TBE电泳缓冲液电泳的标准或低熔点琼脂糖凝胶中快速高效地回收DNA片段。
试剂盒回收柱中采用了基于硅膜的专利技术。
该试剂盒可用于回收25bp到20kb大小的DNA片段。
在100bp—10kbDNA片段大小范围内回收率高达95％（如图1）。
每个GeneJET回收柱拥有结合25µgDNA的能力，能处理多达1g的琼脂糖凝胶。
回收整个流程仅需15分钟，回收的DNA能够直接用于下游的常规实验，如连接、限制性酶切、PCR、测序以及标记。
图1不同大小DNA片段的回收率 基本原理 从琼脂糖凝胶中切出目的DNA片段，置于离心管中，加入结合液进行溶解，之后转入回收柱中。
结合液中的促溶剂溶解琼脂糖、使蛋白变性、促使DNA结合于回收柱中的硅膜上。
结合液中含有颜色指示剂，能够方便监测溶液PH是否最为适合DNA结合。
通过简单的漂洗步骤能够去除杂质。
纯化的DNA通过加入洗脱液从回收柱中洗脱出来。
回收的DNA能够直接应用于下游的实验。
重要提示 试剂盒启用时，先用无水乙醇（96-100％）稀释漂洗液（浓缩的）： 50preps 250preps #K0691 #K0692 漂洗液（浓缩的） 9ml 45ml 无水乙醇 45ml 225ml 总体积 54ml 270ml 加入无水乙醇后，请在试剂瓶做好已加入乙醇标记。
每次使用结合液前检查其是否出现沉淀。
若出现沉淀，加热至37℃以重新溶解，冷却至25℃时再使用。
由于结合液含有刺激物，使用时请戴好手套。
若回收的DNA片段直接用于测序，电泳时请勿重复使用电泳缓冲液。
所需额外试剂和仪器 乙醇96-100％异丙醇3M的乙酸钠，PH5.2（可能需要）离心机1.5ml或者2ml离心管金属浴或水浴锅 纯化方案 注：开始前请阅读第3页的重要提示。
所有的纯化步骤在室温下进行。
使用台式离心机，转速大于12000×g（10000-14000rpm，取决于转子类型）。
步骤1 2 3 4对于≤500bp和>10kb的 DNA片段5 6 78 过程用干净的手术刀或刀片切下含有目的DNA片段的凝胶。
切胶时尽量切出多余的凝胶。
将含DNA的胶块置于已预称重的1.5ml离心管后称重。
记下胶块的重量。
注：若回收的DNA片段用于克隆，须避免紫外照射损伤DNA。
尽量减少紫外暴露时间或者紫外照射时将凝胶置于玻璃或塑料板上。
向胶块中加入1:1体积的结合液（体积：重量）（比如，100mg的凝胶中加入100µl的结合液）。
注：对于浓度大于2％的琼脂糖凝胶，向胶块中加入2:1体积的结合液。
将凝胶混合物在50-60℃条件下放置10min，直到胶块完全溶解。
每隔几分钟颠倒离心管，以加快溶解过程。
必须确保凝胶完全溶解。
加入回收柱前短暂涡旋凝胶混合物。
注意观察溶液的颜色。
黄色指示DNA结合最佳PH。
如果溶液颜色为橙色或紫色，加入10µl3M的乙酸钠溶液，混合物的颜色将变为黄色。
可选：此步骤适用于≤500bp和>10kb的DNA片段。
若DNA片段≤500bp，向溶解的凝胶溶液中加入1:2体积的异丙醇（例 如，100mg凝胶溶于100µl结合液时，加入100µl异丙醇），混合均匀。
若DNA片段>10kb，向溶解的凝胶溶液中加入1:2体积的水（例如，100 mg凝胶溶于100µl结合液时，加入100µl水），混合均匀。
将800µl溶解的凝胶溶液（来自步骤3和4）转移至GeneJET回收柱。
离心1分钟。
倒掉废液并将柱子放回收集管。
注：如果凝胶溶液总体积超出800µl，可以分步将其加入回收柱。
每次加入后离心30-60s并弃掉废液，直至加入所有凝胶溶液。
每个回收柱不能超过1g的琼脂糖凝胶。
可选：此步骤适用于回收的DNA直接用于测序。
向GeneJET回收柱中加入100µl结合液。
离心1分钟，倒掉废液并将柱子放回收集管。
向GeneJET回收柱中加入700µl漂洗液（用无水乙醇稀释，见第3页）。
离心1分钟，倒掉废液并将柱子放回收集管。
将空的回收柱再离心1分钟，以完全除去残留的漂洗液。
注：此步骤是为了避免回收的DNA中残留乙醇。
若DNA中残留乙醇，可能会抑制下游的酶促反应。
9 将GeneJET回收柱转入新的1.5ml离心管（未提供）。
向回收柱中膜中心加 入50µl洗脱液。
离心1分钟。
注： 若DNA量较低，可适当减少洗脱体积以增加DNA浓度。
洗脱体积在20-50µl之间 不会明显减少DNA产量。
但不推荐洗脱体积少于10µl。
如果DNA片段>10kb，洗脱液在加入回收柱之前应预热至65℃。
如果洗脱体积是10µl，DNA量≤5µg，在室温时放置1分钟再离心。
10 弃掉GeneJET回收柱，回收的DNA储存于-20℃。
问题 DNA回收率低 琼脂糖凝胶孔中无DNA测序结果不好 问题解决方案 可能的原因及解决方案含DNA的胶块未能完全溶解确保按照1:1的量将结合液加入已称重的凝胶块（例如，100mg的琼脂糖凝胶中加入100µl的结合液）。
确保凝胶块完全溶解。
较大量的琼脂糖凝胶或浓度大于2％的琼脂糖凝胶需要额外的时间来溶解。
在某些情况下，较大体积的结合液和额外的涡旋能够加速溶解过程。
DNA结合率低注意观察胶块溶解后溶液的颜色。
黄色指示DNA结合的最佳PH。
如果溶液颜色为橙色或紫色，加入10µl3M的乙酸钠溶液，混合物的颜色将变为黄色。
漂洗不充分确保向漂洗液（浓缩）首次使用时加入推荐体积的无水乙醇。
DNA洗脱率低将洗脱液加入到回收柱膜的中心，不要加到回收柱管壁上。
使用20-50µl的洗脱液，并确保洗脱液能完全覆盖膜的表面。
当回收较大量的DNA（>15µg），可将洗脱液体积加倍，或者洗脱两次。
在步骤8中，确保去除所有的残留漂洗液。
较长时间的离心有助于去除漂洗液。
存在残留的乙醇在步骤8中，确保去除所有的残留漂洗液。
较长时间的离心有助于去除漂洗液。
回收电泳缓冲液的影响如果提取的DNA直接用于测序，凝胶制备和凝胶电泳都应用新鲜的电泳缓冲液。
下游实验不成功 残留乙醇的影响在步骤8中，确保去除所有的残留漂洗液。
较长时间的离心有助于去除漂洗液。
膜漂洗不充分在漂洗过程中，若收集管中液体过满，一些漂洗液会残留于GeneJET回收柱的底部。
为避免此种情况，每次离心后应倒掉收集管中废液。
琼脂糖污染确保步骤1-4中凝胶块完全溶解。
保证按1:1的比例加入结合液。
较大量的琼脂糖凝胶或浓度大于2％的琼脂糖凝胶需要额外的时间来溶解。
在某些情况下，较大体积的结合液和额外的涡旋能够加速溶解过程。
过量盐分污染确保步骤7完整有效进行。
加入漂洗液后放置几分钟后再进行离心。
参考文献：
1.Vogelstein,B.andGillespie,
D.,PreparativeandanalyticalpurificationofDNAfromagarose,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,76,615-619,1979.2.Marko,
M.A.,Chipperfield,R.andBirnboim,
H.C.,Aprocedureforthelarge-scaleisolationofhighlypurifiedplasmidDNAusingalkalineextractionandbindingtoglasspowder,Anal.Biochem.,121,382-387,1982.3.Boom,
R.,Sol,
C.J.A.,etal.,Rapidandsimplemethodforpurificationofnucleicacids,
J.Clin.Microbiol.,Mar,495-503,1990. 安全信息 结合液 辨别危险的成分标签：盐酸胍Xn有害 风险术语R20/21/22R32R52/53 吸入、与皮肤接触和吞食是有害的；与酸接触释放出极高毒性气体；对水生生物有害，可能在水生环境中造成长期不利影响； 安全术语 S9 保持容器在通风良好的场所； S23 请勿吸入气体/烟雾/蒸汽/喷雾 S36/37穿戴合适的防护服和手套 S60 该物质及其容器必须作为危险废物处置 S61 避免释放到环境中，参考特别指示/安全数据说明书； 产品使用限制本产品的开发、设计及销售专供研究和体外试验使用。
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