ScientificGeneJET基因组DNA纯化试剂盒
#K0721，#K0722
使用前请阅读贮存信息（第4页）！
/onebio
1 分析证书 ThermoScientificGeneJET基因组DNA纯化试剂盒经检验证明该试剂盒可按照提供的方案从200μl血液和5mg哺乳动物组织中分离基因组DNA。
纯化得到的基因组DNAA260/280≥1.7。
通过琼脂糖凝集电泳及EB染色观察到大于30kb的单一条带。
纯化后的基因组DNA的功能质量是通过PCR扩增单拷贝基因及限制性酶切的方法来评测。
质量授权人： Jurgita
6 A．哺乳动物组织和啮齿动物尾部组织基因组DNA纯化方案...................................6B．哺乳动物培养细胞基因组DNA纯化方案...............................................................8C．哺乳动物血细胞基因组DNA纯化方案...................................................................9D．革兰氏阴性菌基因组DNA纯化方案....................................................................10E．革兰氏阳性菌基因组DNA纯化方案.....................................................................11F．酵母基因组DNA纯化方案.....................................................................................12
3 试剂盒组成 GeneJET基因组DNA纯化试剂盒 蛋白酶K溶液RNaseA溶液消化液裂解液漂洗缓冲液Ⅰ（浓缩）漂洗缓冲液Ⅱ（浓缩）洗脱缓冲液（10mMTris-HCl，PH9.0，0.5mMEDTA）GeneJET基因组DNA纯化柱（预装入收集管中）收集管 #K072150preps1.2ml1ml11ml24ml10ml10ml30ml5050 #K0722250preps5×1.2ml5×1ml55ml2×60ml40ml40ml150ml250250 贮存条件 蛋白酶K和RNaseA溶液未打开时，在室温下是稳定的。
打开后应贮存于-20°
C。
试剂盒的其它组分应在室温条件下（15-25℃）贮存。
产品介绍 GeneJETTM基因组DNA纯化试剂盒是一个快速高效的纯化系统，能从哺乳动物培养细胞、组织样品、全血、细菌和酵母中提纯高质量的基因组DNA。
试剂盒采用了基于硅膜的技术的方便的离心柱，无需昂贵的树脂、有毒的酚氯仿抽提和耗时的乙醇沉淀。
细胞裂解以后，利用GeneJET基因组DNA纯化试剂盒能在20分钟内纯化得到大小超过30kb的DNA。
所得到的高质量的纯化DNA能够直接用于PCR、Southernblotting和酶反应。
表1所示为不同材料来源其基因组DNA的代表产量。
基本原理 根据原材料不同，样品通过所提供的消化液或裂解液中的蛋白酶K进行消化。
样品通过RNaseA处理以除去RNA。
之后裂解液与乙醇混合，加入到纯化柱中，DNA结合到柱中的硅膜上。
杂质通过漂洗缓冲液清洗纯化柱的方法有效去除。
最后，纯化的基因组DNA在低离子强度条件下，用无核酸酶的水洗脱出来。
4 表
1.不同材料来源的基因组DNA的代表产量。
来源 数量 产量，μg 哺乳动物血液 200μl 4-
6 小鼠心脏 10mg 10-15 小鼠尾 0.5cm 8-10 大鼠肝脏 10mg 10-20 大鼠脾脏 5mg 20-30 大鼠肾脏 10mg 25-30 兔耳 20mg 5-10 Bacillus
pumilis细胞 2×109cells 10-15 Escherichiacoli细胞 2×109cells 10-15 HeLa细胞 2×106cells 15-20 Jurkat细胞 5×106cells 25-30 haromycescerevisiae细胞 1×108cells 3-
5 重要提示 缓冲液准备和处理 为减少DNA的降解，须避免样品的反复冻融，且样品为新鲜的材料或快速冻存于-20℃或-70℃的材料。
首次使用前，请加入指定量的乙醇（96-100％）到漂洗缓冲液1（浓缩的）和漂洗缓冲液2（浓缩的）： 50preps（#K0721） 250preps（#K0722） 漂洗缓冲液1漂洗缓冲液2漂洗缓冲液1漂洗缓冲液
2 浓缩的漂洗缓冲液10ml 10ml 40ml 40ml 乙醇（96-100％）30ml 30ml 120ml 120ml 总体积40ml 40ml 160ml 160ml 加入乙醇后，请在瓶盖上做好已加入乙醇的标记。
每次使用前检查消化液或裂解液中是否出现盐沉淀。
若出现盐沉淀，将溶液置于37℃重新溶解，之后冷却至25℃后使用。
裂解液和漂洗缓冲液1含有刺激性物质，接触皮肤、吸入、吞食有害。
使用时戴好手套（见第12页的安全信息）。
5 所需额外试剂和仪器 移液管和枪头涡旋仪乙醇（96-100％）1.5ml离心管离心机热混合仪，振动型恒温水浴或能加热至56℃的摇摆平台一次性手套 缓冲液针对哺乳动物培养细胞的裂解： PBS（137mMNaCl,2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4，pH7.4）。
TEbuffer（10mMTris-HCl，PH8.0，1mMEDTA）针对革兰氏阳性细菌的裂解：革兰氏阳性菌裂解缓冲液（20mMTrisHCl,pH8.0，2mMEDTA，1.2％Triton X-100，使用前加入溶菌素至终浓度为20mg/ml）针对酵母细胞的裂解： 酵母裂解缓冲液（5mg/ml藤黄节杆菌酶20T，1M山梨醇，0.1MEDTA） 基因组DNA纯化方案 从哺乳动物组织、啮齿动物尾部组织、培养的哺乳动物细胞、哺乳动物血液、革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌和酵母中纯化DNA的方案见第4-10页。
A、哺乳动物组织和啮齿动物尾部组织基因组DNA纯化方案 步骤过程 取20mg哺乳动物组织（10mg的脾脏组织）、0.6cm大鼠的尾部片段或0.5cm
1 小鼠尾部片段，用研钵在液氮中将其研磨成粉末。
也可选择将所取组织切成小 碎片或用搅拌器将其破碎。
将材料收集于1.5ml离心管中（未提供），加入180μl消化液进行重悬。
之后
2 加入20μl蛋白酶K溶液，通过涡旋或移液器吹吸获得均质的悬浮液。
将样本置于56℃孵育，直到组织充分裂解，无剩余颗粒。
孵育期间间或涡旋 离心管几次，或使用振荡水浴锅、摇摆平台或恒温混匀仪。
建议孵育时间：
3 所用材料量 建议孵育时间 5mg组织（脾脏除外） 1小时 10mg组织（脾脏除外） 2小时 20mg组织（脾脏除外） 3小时
6 5mg脾脏组织 2小时 10mg脾脏组织 3小时 小鼠尾部（0.5cm），大鼠尾部（0.6cm）6小时 注：根据所用材料类型和所用材料量，裂解时间会有所差别。
在一些情况下，孵育时间可 以延长至6-8小时或过夜（啮齿动物尾部），直到完全裂解。
4 加入20μlRNaseA溶液，涡旋混匀，室温孵育10分钟。
5 加入200μl裂解液，涡旋15秒以混合均匀，直到得到均质混合物。
6 加入400μl50％的乙醇，通过涡旋或移液器吹吸混合均匀。
将GeneJET基因组DNA纯化柱装入收集管中，将上述得到的裂解溶液加入纯
7 化柱中。
将纯化柱以6000×g的速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管， 将纯化柱放入一个新的2ml收集管中（已提供）。
加入500μl的漂洗缓冲液Ⅰ（已加入乙醇）。
8000×g离心1分钟。
倒掉流穿
8 液，将纯化柱放回收集管中。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅱ（已加入乙醇），以最大速度（≥12000 ×g）离心3分钟。
可选：如果发现纯化柱中有残留溶液，将收集管倒空，并再次将纯化柱以最大
9 速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管，将GeneJET基因组DNA纯化柱装入1.5ml无菌的 离心管中（未提供）。
向GeneJET基因组DNA纯化柱的膜中心加入200μl洗脱缓冲液以洗脱基因组DNA。
室温放置2分钟后，以8000×g的速度离心1分钟。
注： 10 为了得到最高的DNA产量，可用200μl洗脱缓冲液再次重复洗脱步骤。
如果需要较高浓度的DNA，或者从较少的样本材料（如<5mg组织）中提取DNA， 所加入洗脱液的体积可以减少至50-100μl。
但请注意洗脱缓冲液体积越小，洗脱得到 的最终DNA量也会越少。
11 弃掉纯化柱。
将纯化的DNA立即用于下游实验或者贮存于-20℃。
7 B、哺乳动物培养细胞基因组DNA纯化方案 步骤过程 a)悬浮细胞收集约5×106个细胞于离心管中，以250×g离心5分钟。
弃掉上清。
用PBS 漂洗一次以除去残留的培养基。
重复离心步骤，弃掉上清。
b)贴壁细胞
1 弃掉细胞培养平板中（约含5×106个细胞）的细胞生长培养基。
用PBS漂洗 一次以除去残留的培养基，之后弃掉PBS。
将细胞刮下至适当体积的PBS中， 或用胰蛋白酶消化将细胞分离。
将细胞转移至离心管中，250×g离心5min， 弃掉上清。
将步骤1a或1b中收集的细胞重悬于200μlTE缓冲液或PBS中。
加入200μl
2 裂解缓冲液和20μl蛋白酶K溶液。
通过涡旋或移液器吹吸获得均质的悬浮液。
将样本置于56℃孵育，期间间或涡旋离心管几次，或使用振荡水浴锅、摇摆
3 平台或恒温混匀仪，直到细胞充分裂解（10分钟）。
4 加入20μlRNaseA溶液，涡旋混匀，室温孵育10分钟。
5 加入400μl50％的乙醇，通过涡旋或移液器吹吸混合均匀。
将GeneJET基因组DNA纯化柱装入收集管中，将上述得到的裂解溶液加入纯
6 化柱中。
将纯化柱以6000×g的速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管， 将纯化柱放入一个新的2ml收集管中（已提供）。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅰ（已加入乙醇）。
8000×g离心1分钟。
7 倒掉流穿液，将纯化柱放回收集管中。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅱ（已加入乙醇），以最大速度（≥12000 ×g）离心3分钟。
可选：如果发现纯化柱中有残留溶液，将收集管倒空，并再次将纯化柱以最大
8 速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管，将GeneJET基因组DNA纯化柱装入1.5ml无菌的 离心管中（未提供）。
向GeneJET基因组DNA纯化柱的膜中心加入200μl洗脱缓冲液以洗脱基因组 DNA。
室温放置2分钟后，以8000×g的速度离心1分钟。
注：
9 为了得到最高的DNA产量，可用200μl洗脱缓冲液再次重复洗脱步骤。
如果需要较高浓度的DNA，或者从较少的样本材料（如≤1×106个哺乳动物细胞）中 提取DNA，所加入洗脱液的体积可以减少至50-100μl。
但请注意洗脱缓冲液体积越 小，洗脱得到的最终DNA量也会越少。
10 弃掉纯化柱。
将纯化的DNA立即用于下游实验或者贮存于-20℃。
8 C、哺乳动物血细胞基因组DNA纯化方案 步骤过程 向200μl全血中加入400μl裂解液和20μl蛋白酶K溶液，通过涡旋或移液器
1 吹吸充分混匀，获得均质的悬浮液。
将样本置于56℃孵育，期间间或涡旋离心管几次，或使用振荡水浴锅、摇摆
2 平台或恒温混匀仪，直到细胞完全裂解（10分钟）。
3 加入200μl乙醇（96-100％），涡旋或用移液器吹吸混合均匀。
将GeneJET基因组DNA纯化柱装入收集管中，将上述得到的裂解溶液加入纯
4 化柱中。
将纯化柱以6000×g的速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管， 将纯化柱放入一个新的2ml收集管中（已提供）。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅰ（已加入乙醇）。
8000×g离心1分钟。
5 倒掉流穿液，将纯化柱放回收集管中。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅱ（已加入乙醇），以最大速度（≥12000 ×g）离心3分钟。
可选：如果发现纯化柱中有残留溶液，将收集管倒空，并再次将纯化柱以最大
6 速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管，将GeneJET基因组DNA纯化柱装入1.5ml无菌的 离心管中（未提供）。
向GeneJET基因组DNA纯化柱的膜中心加入200μl洗脱缓冲液以洗脱基因组DNA。
室温放置2分钟后，以8000×g的速度离心1分钟。
注：
7 为了得到最高的DNA产量，可用200μl洗脱缓冲液再次重复洗脱步骤。
如果需要较高浓度的DNA，或者从较少的样本材料（如50μl血液）中提取DNA，所 加入洗脱液的体积可以减少至50-100μl。
但请注意洗脱缓冲液体积越小，洗脱得到的 最终DNA量也会越少。
8 弃掉纯化柱。
将纯化的DNA立即用于下游实验或者贮存于-20℃。
9 D、革兰氏阴性细菌基因组DNA纯化方案 步骤过程 收集多至2×109个细菌细胞于1.5ml或2ml离心管中。
以5000×g的速度离
1 心10分钟。
弃掉上清。
将收集的菌体重悬于180μl消化液中。
加入20μl蛋白酶K溶液，通过涡旋或
2 移液器吹吸充分混匀，获得均质的悬浮液。
将样本置于56℃孵育，期间间或涡旋离心管几次，或使用振荡水浴锅、摇摆
3 平台或恒温混匀仪，直到细胞完全裂解（~30分钟）。
4 加入20μlRNaseA溶液，涡旋混匀，室温孵育10分钟。
5 加入200μl裂解缓冲液，涡旋15秒以完全混匀，得到均质混合物。
6 加入400μl50％的乙醇，通过涡旋或移液器吹吸混合均匀。
将GeneJET基因组DNA纯化柱装入收集管中，将上述得到的裂解溶液加入纯
7 化柱中。
将纯化柱以6000×g的速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管， 将纯化柱放入一个新的2ml收集管中（已提供）。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅰ（已加入乙醇）。
8000×g离心1分钟。
8 倒掉流穿液，将纯化柱放回收集管中。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅱ（已加入乙醇），以最大速度（≥12000 ×g）离心3分钟。
可选：如果发现纯化柱中有残留溶液，将收集管倒空，并再次将纯化柱以最大
9 速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管，将GeneJET基因组DNA纯化柱装入1.5ml无菌的 离心管中（未提供）。
向GeneJET基因组DNA纯化柱的膜中心加入200μl洗脱缓冲液以洗脱基因组DNA。
室温放置2分钟后，以8000×g的速度离心1分钟。
注： 10 为了得到最高的DNA产量，可用200μl洗脱缓冲液再次重复洗脱步骤。
如果需要较高浓度的DNA，或者从较少的样本材料中提取DNA，所加入洗脱液的体 积可以减少至50-100μl。
但请注意洗脱缓冲液体积越小，洗脱得到的最终DNA量也 会越少。
11 弃掉纯化柱。
将纯化的DNA立即用于下游实验或者贮存于-20℃。
10
E、革兰氏阳性细菌基因组DNA纯化方案开始之前： 准备革兰氏阳性细菌裂解缓冲液：20mMTris-HCl，PH8.0，2mMEDTA，1.2％TritonX-100，使用前加入溶解酵素至浓度为20mg/ml。
步骤过程 收集约2×109个细菌细胞于1.5ml或2ml离心管中，以5000×g的速度离心
1 10分钟，弃掉上清。
2 将菌体重悬于180μl革兰氏阳性细菌裂解缓冲液中，37℃孵育30分钟。
加入200μl裂解缓冲液和20μl蛋白酶
K，通过涡旋或移液器吹吸充分混匀，
3 获得均质的悬浮液。
将样本置于56℃孵育，期间间或涡旋离心管几次，或使用振荡水浴锅、摇摆
4 平台或恒温混匀仪，直到细胞完全裂解（~30分钟）。
5 加入20μlRNaseA溶液，涡旋混匀，室温孵育10分钟。
6 加入400μl50％的乙醇，通过涡旋或移液器吹吸混合均匀。
将GeneJET基因组DNA纯化柱装入收集管中，将上述得到的裂解溶液加入纯
7 化柱中。
将纯化柱以6000×g的速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管， 将纯化柱放入一个新的2ml收集管中（已提供）。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅰ（已加入乙醇）。
8000×g离心1分钟。
8 倒掉流穿液，将纯化柱放回收集管中。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅱ（已加入乙醇），以最大速度（≥12000 ×g）离心3分钟。
可选：如果发现纯化柱中有残留溶液，将收集管倒空，并再次将纯化柱以最大
9 速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管，将GeneJET基因组DNA纯化柱装入1.5ml无菌的 离心管中（未提供）。
向GeneJET基因组DNA纯化柱的膜中心加入200μl洗脱缓冲液以洗脱基因组DNA。
室温放置2分钟后，以8000×g的速度离心1分钟。
注： 10 为了得到最高的DNA产量，可用200μl洗脱缓冲液再次重复洗脱步骤。
如果需要较高浓度的DNA，或者从较少的样本材料中提取DNA，所加入洗脱液的体 积可以减少至50-100μl。
但请注意洗脱缓冲液体积越小，洗脱得到的最终DNA量也 会越少。
11 弃掉纯化柱。
将纯化的DNA立即用于下游实验或者贮存于-20℃。
11 F：酵母基因组DNA纯化方案开始之前： 准备酵母裂解缓冲液：5mg/ml酵母裂解酶20T，1M山梨醇，0.1MEDTA。
步骤过程 收集多至1×108个酵母细胞于1.5ml或2ml离心管中，以最大速度（≥12000
1 ×g）离心5-10秒，弃掉上清。
2 将收集的菌体重悬于500μl酵母裂解缓冲液中。
37℃孵育1小时。
3 3000×g离心10分钟，弃掉上清。
将菌体重悬于180μl消化液中。
加入20μl蛋白酶
K，通过涡旋或移液器吹吸
4 充分混匀，获得均质的悬浮液。
将样本置于56℃孵育，期间间或涡旋离心管几次，或使用振荡水浴锅、摇摆
5 平台或恒温混匀仪，直到细胞完全裂解（~45分钟）。
6 加入20μlRNaseA溶液，涡旋混匀，室温孵育10分钟。
7 加入200μl裂解缓冲液，涡旋15秒以完全混匀，得到均质混合物。
8 加入400μl50％的乙醇，通过涡旋或移液器吹吸混合均匀。
将GeneJET基因组DNA纯化柱装入收集管中，将上述得到的裂解溶液加入纯
9 化柱中。
将纯化柱以6000×g的速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管， 将纯化柱放入一个新的2ml收集管中（已提供）。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅰ（已加入乙醇）。
8000×g离心1分钟。
10 倒掉流穿液，将纯化柱放回收集管中。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅱ（已加入乙醇），以最大速度（≥12000 ×g）离心3分钟。
可选：如果发现纯化柱中有残留溶液，将收集管倒空，并再次将纯化柱以最大 11 速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管，将GeneJET基因组DNA纯化柱装入1.5ml无菌的 离心管中（未提供）。
向GeneJET基因组DNA纯化柱的膜中心加入200μl洗脱缓冲液以洗脱基因组DNA。
室温放置2分钟后，以8000×g的速度离心1分钟。
注： 12 为了得到最高的DNA产量，可用200μl洗脱缓冲液再次重复洗脱步骤。
如果需要较高浓度的DNA，或者从较少的样本材料中提取DNA，所加入洗脱液的体 积可以减少至50-100μl。
但请注意洗脱缓冲液体积越小，洗脱得到的最终DNA量也 会越少。
13 弃掉纯化柱。
将纯化的DNA立即用于下游实验或者贮存于-20℃。
12 疑难解答 问题 纯化的DNA产量低 纯化的DNA降解RNA污染纯化柱堵塞对下游酶反应的抑制 可能的原因及解决方案样品材料过多减少所用样品材料的量，在裂解步骤中不要使用多于提示量的组织和细胞。
样品材料未充分消化在56℃条件下，延长蛋白酶K消化时间，直至完全消化，无剩余颗粒。
裂解液中未加入乙醇在将样品加入纯化柱前，确保向裂解液中加入乙醇。
裂解液未与乙醇充分混合向裂解液中加入乙醇后，通过涡旋或移液器吹吸使样品充分混匀。
漂洗缓冲液中未加入乙醇确保首次使用漂洗缓冲液1和2时向其中加入乙醇，按照第3页关于漂洗缓冲液的说明。
样品反复冻融应避免样品的反复冻融。
使用新的样品提取DNA，尽可能采用新鲜材料。
样品贮存条件不合适使用前将哺乳动物组织贮存于-70℃，将细菌贮存于-20℃。
全血在4℃条件下贮存不能超过1-2天。
血液样品若需长期贮存，可分装为200μl，然后贮存于-20℃。
未进行RNaseA酶处理按照纯化方案中的描述进行RNaseA处理。
样品材料过多减少所用样品材料的量。
对于裂解液制备，推荐材料最大量为：2×109个细菌细胞，5×106个悬浮细胞，20mg哺乳动物组织。
组织未完全消化在56℃条件下，延长蛋白酶K消化时间，直至完全消化，无剩余颗粒。
纯化的DNA中含有残留乙醇如果用漂洗缓冲液Ⅱ漂洗以后，发现纯化柱中有残留溶液，需将收集管倒空，并再次将纯化柱以最大速度离心1分钟。
洗脱的RNA中含有盐分按照正确的顺序使用漂洗缓冲液。
始终先用漂洗缓冲液Ⅰ，再用漂洗缓冲液Ⅱ。
13 安全信息 裂解液、漂洗缓冲液Ⅰ Xn有害辨别危险的成分标签：盐酸胍 风险术语 R22 吞食有害 R36/38对眼睛和皮肤具有刺激性 安全术语 S23 请勿吸入气体/烟雾/蒸汽/喷雾 S26 若溅入眼睛，立即用大量清水冲洗，并寻求医生治疗 S36/37穿戴合适的防护服和手套 S60 该物质及其容器必须作为危险废物处置 蛋白酶
K Xn有害
R.,C.J.A.Sol,
M.M.M.Salimans,
C.L.Jansen,
P.M.E.W.Dillen,andJ.vanderNoordaa.1990.Rapidandsimplemethodforpurificationofnucleicacids.J.Clin.Microbiol.28:495–503. 产品使用限制本产品的开发、设计及销售专供研究和体外试验使用。
本产品不得用于诊断试验或药物 开发，也不适合向人或动物注射。
了解本产品的材料安全数据表，请浏览/onebio。
©2012ThermoFisherScientific公司，版权所有。
所有其他商标均归ThermoFisherScientific公司或其子公司所有。
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1 分析证书 ThermoScientificGeneJET基因组DNA纯化试剂盒经检验证明该试剂盒可按照提供的方案从200μl血液和5mg哺乳动物组织中分离基因组DNA。
纯化得到的基因组DNAA260/280≥1.7。
通过琼脂糖凝集电泳及EB染色观察到大于30kb的单一条带。
纯化后的基因组DNA的功能质量是通过PCR扩增单拷贝基因及限制性酶切的方法来评测。
质量授权人： Jurgita
Zilinskiene
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目录
页码
试剂盒组成................................................................................................................................
贮存条件....................................................................................................................................
4产品介绍....................................................................................................................................
4基本原理....................................................................................................................................
4重要提示....................................................................................................................................
5所需额外试剂和仪器................................................................................................................
6基因组DNA纯化方案.............................................................................................................
6 A．哺乳动物组织和啮齿动物尾部组织基因组DNA纯化方案...................................6B．哺乳动物培养细胞基因组DNA纯化方案...............................................................8C．哺乳动物血细胞基因组DNA纯化方案...................................................................9D．革兰氏阴性菌基因组DNA纯化方案....................................................................10E．革兰氏阳性菌基因组DNA纯化方案.....................................................................11F．酵母基因组DNA纯化方案.....................................................................................12
问题解决方案..........................................................................................................................
13安全信息..................................................................................................................................
143 试剂盒组成 GeneJET基因组DNA纯化试剂盒 蛋白酶K溶液RNaseA溶液消化液裂解液漂洗缓冲液Ⅰ（浓缩）漂洗缓冲液Ⅱ（浓缩）洗脱缓冲液（10mMTris-HCl，PH9.0，0.5mMEDTA）GeneJET基因组DNA纯化柱（预装入收集管中）收集管 #K072150preps1.2ml1ml11ml24ml10ml10ml30ml5050 #K0722250preps5×1.2ml5×1ml55ml2×60ml40ml40ml150ml250250 贮存条件 蛋白酶K和RNaseA溶液未打开时，在室温下是稳定的。
打开后应贮存于-20°
C。
试剂盒的其它组分应在室温条件下（15-25℃）贮存。
产品介绍 GeneJETTM基因组DNA纯化试剂盒是一个快速高效的纯化系统，能从哺乳动物培养细胞、组织样品、全血、细菌和酵母中提纯高质量的基因组DNA。
试剂盒采用了基于硅膜的技术的方便的离心柱，无需昂贵的树脂、有毒的酚氯仿抽提和耗时的乙醇沉淀。
细胞裂解以后，利用GeneJET基因组DNA纯化试剂盒能在20分钟内纯化得到大小超过30kb的DNA。
所得到的高质量的纯化DNA能够直接用于PCR、Southernblotting和酶反应。
表1所示为不同材料来源其基因组DNA的代表产量。
基本原理 根据原材料不同，样品通过所提供的消化液或裂解液中的蛋白酶K进行消化。
样品通过RNaseA处理以除去RNA。
之后裂解液与乙醇混合，加入到纯化柱中，DNA结合到柱中的硅膜上。
杂质通过漂洗缓冲液清洗纯化柱的方法有效去除。
最后，纯化的基因组DNA在低离子强度条件下，用无核酸酶的水洗脱出来。
4 表
1.不同材料来源的基因组DNA的代表产量。
来源 数量 产量，μg 哺乳动物血液 200μl 4-
6 小鼠心脏 10mg 10-15 小鼠尾 0.5cm 8-10 大鼠肝脏 10mg 10-20 大鼠脾脏 5mg 20-30 大鼠肾脏 10mg 25-30 兔耳 20mg 5-10 Bacillus
pumilis细胞 2×109cells 10-15 Escherichiacoli细胞 2×109cells 10-15 HeLa细胞 2×106cells 15-20 Jurkat细胞 5×106cells 25-30 haromycescerevisiae细胞 1×108cells 3-
5 重要提示 缓冲液准备和处理 为减少DNA的降解，须避免样品的反复冻融，且样品为新鲜的材料或快速冻存于-20℃或-70℃的材料。
首次使用前，请加入指定量的乙醇（96-100％）到漂洗缓冲液1（浓缩的）和漂洗缓冲液2（浓缩的）： 50preps（#K0721） 250preps（#K0722） 漂洗缓冲液1漂洗缓冲液2漂洗缓冲液1漂洗缓冲液
2 浓缩的漂洗缓冲液10ml 10ml 40ml 40ml 乙醇（96-100％）30ml 30ml 120ml 120ml 总体积40ml 40ml 160ml 160ml 加入乙醇后，请在瓶盖上做好已加入乙醇的标记。
每次使用前检查消化液或裂解液中是否出现盐沉淀。
若出现盐沉淀，将溶液置于37℃重新溶解，之后冷却至25℃后使用。
裂解液和漂洗缓冲液1含有刺激性物质，接触皮肤、吸入、吞食有害。
使用时戴好手套（见第12页的安全信息）。
5 所需额外试剂和仪器 移液管和枪头涡旋仪乙醇（96-100％）1.5ml离心管离心机热混合仪，振动型恒温水浴或能加热至56℃的摇摆平台一次性手套 缓冲液针对哺乳动物培养细胞的裂解： PBS（137mMNaCl,2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4，pH7.4）。
TEbuffer（10mMTris-HCl，PH8.0，1mMEDTA）针对革兰氏阳性细菌的裂解：革兰氏阳性菌裂解缓冲液（20mMTrisHCl,pH8.0，2mMEDTA，1.2％Triton X-100，使用前加入溶菌素至终浓度为20mg/ml）针对酵母细胞的裂解： 酵母裂解缓冲液（5mg/ml藤黄节杆菌酶20T，1M山梨醇，0.1MEDTA） 基因组DNA纯化方案 从哺乳动物组织、啮齿动物尾部组织、培养的哺乳动物细胞、哺乳动物血液、革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌和酵母中纯化DNA的方案见第4-10页。
A、哺乳动物组织和啮齿动物尾部组织基因组DNA纯化方案 步骤过程 取20mg哺乳动物组织（10mg的脾脏组织）、0.6cm大鼠的尾部片段或0.5cm
1 小鼠尾部片段，用研钵在液氮中将其研磨成粉末。
也可选择将所取组织切成小 碎片或用搅拌器将其破碎。
将材料收集于1.5ml离心管中（未提供），加入180μl消化液进行重悬。
之后
2 加入20μl蛋白酶K溶液，通过涡旋或移液器吹吸获得均质的悬浮液。
将样本置于56℃孵育，直到组织充分裂解，无剩余颗粒。
孵育期间间或涡旋 离心管几次，或使用振荡水浴锅、摇摆平台或恒温混匀仪。
建议孵育时间：
3 所用材料量 建议孵育时间 5mg组织（脾脏除外） 1小时 10mg组织（脾脏除外） 2小时 20mg组织（脾脏除外） 3小时
6 5mg脾脏组织 2小时 10mg脾脏组织 3小时 小鼠尾部（0.5cm），大鼠尾部（0.6cm）6小时 注：根据所用材料类型和所用材料量，裂解时间会有所差别。
在一些情况下，孵育时间可 以延长至6-8小时或过夜（啮齿动物尾部），直到完全裂解。
4 加入20μlRNaseA溶液，涡旋混匀，室温孵育10分钟。
5 加入200μl裂解液，涡旋15秒以混合均匀，直到得到均质混合物。
6 加入400μl50％的乙醇，通过涡旋或移液器吹吸混合均匀。
将GeneJET基因组DNA纯化柱装入收集管中，将上述得到的裂解溶液加入纯
7 化柱中。
将纯化柱以6000×g的速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管， 将纯化柱放入一个新的2ml收集管中（已提供）。
加入500μl的漂洗缓冲液Ⅰ（已加入乙醇）。
8000×g离心1分钟。
倒掉流穿
8 液，将纯化柱放回收集管中。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅱ（已加入乙醇），以最大速度（≥12000 ×g）离心3分钟。
可选：如果发现纯化柱中有残留溶液，将收集管倒空，并再次将纯化柱以最大
9 速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管，将GeneJET基因组DNA纯化柱装入1.5ml无菌的 离心管中（未提供）。
向GeneJET基因组DNA纯化柱的膜中心加入200μl洗脱缓冲液以洗脱基因组DNA。
室温放置2分钟后，以8000×g的速度离心1分钟。
注： 10 为了得到最高的DNA产量，可用200μl洗脱缓冲液再次重复洗脱步骤。
如果需要较高浓度的DNA，或者从较少的样本材料（如<5mg组织）中提取DNA， 所加入洗脱液的体积可以减少至50-100μl。
但请注意洗脱缓冲液体积越小，洗脱得到 的最终DNA量也会越少。
11 弃掉纯化柱。
将纯化的DNA立即用于下游实验或者贮存于-20℃。
7 B、哺乳动物培养细胞基因组DNA纯化方案 步骤过程 a)悬浮细胞收集约5×106个细胞于离心管中，以250×g离心5分钟。
弃掉上清。
用PBS 漂洗一次以除去残留的培养基。
重复离心步骤，弃掉上清。
b)贴壁细胞
1 弃掉细胞培养平板中（约含5×106个细胞）的细胞生长培养基。
用PBS漂洗 一次以除去残留的培养基，之后弃掉PBS。
将细胞刮下至适当体积的PBS中， 或用胰蛋白酶消化将细胞分离。
将细胞转移至离心管中，250×g离心5min， 弃掉上清。
将步骤1a或1b中收集的细胞重悬于200μlTE缓冲液或PBS中。
加入200μl
2 裂解缓冲液和20μl蛋白酶K溶液。
通过涡旋或移液器吹吸获得均质的悬浮液。
将样本置于56℃孵育，期间间或涡旋离心管几次，或使用振荡水浴锅、摇摆
3 平台或恒温混匀仪，直到细胞充分裂解（10分钟）。
4 加入20μlRNaseA溶液，涡旋混匀，室温孵育10分钟。
5 加入400μl50％的乙醇，通过涡旋或移液器吹吸混合均匀。
将GeneJET基因组DNA纯化柱装入收集管中，将上述得到的裂解溶液加入纯
6 化柱中。
将纯化柱以6000×g的速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管， 将纯化柱放入一个新的2ml收集管中（已提供）。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅰ（已加入乙醇）。
8000×g离心1分钟。
7 倒掉流穿液，将纯化柱放回收集管中。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅱ（已加入乙醇），以最大速度（≥12000 ×g）离心3分钟。
可选：如果发现纯化柱中有残留溶液，将收集管倒空，并再次将纯化柱以最大
8 速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管，将GeneJET基因组DNA纯化柱装入1.5ml无菌的 离心管中（未提供）。
向GeneJET基因组DNA纯化柱的膜中心加入200μl洗脱缓冲液以洗脱基因组 DNA。
室温放置2分钟后，以8000×g的速度离心1分钟。
注：
9 为了得到最高的DNA产量，可用200μl洗脱缓冲液再次重复洗脱步骤。
如果需要较高浓度的DNA，或者从较少的样本材料（如≤1×106个哺乳动物细胞）中 提取DNA，所加入洗脱液的体积可以减少至50-100μl。
但请注意洗脱缓冲液体积越 小，洗脱得到的最终DNA量也会越少。
10 弃掉纯化柱。
将纯化的DNA立即用于下游实验或者贮存于-20℃。
8 C、哺乳动物血细胞基因组DNA纯化方案 步骤过程 向200μl全血中加入400μl裂解液和20μl蛋白酶K溶液，通过涡旋或移液器
1 吹吸充分混匀，获得均质的悬浮液。
将样本置于56℃孵育，期间间或涡旋离心管几次，或使用振荡水浴锅、摇摆
2 平台或恒温混匀仪，直到细胞完全裂解（10分钟）。
3 加入200μl乙醇（96-100％），涡旋或用移液器吹吸混合均匀。
将GeneJET基因组DNA纯化柱装入收集管中，将上述得到的裂解溶液加入纯
4 化柱中。
将纯化柱以6000×g的速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管， 将纯化柱放入一个新的2ml收集管中（已提供）。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅰ（已加入乙醇）。
8000×g离心1分钟。
5 倒掉流穿液，将纯化柱放回收集管中。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅱ（已加入乙醇），以最大速度（≥12000 ×g）离心3分钟。
可选：如果发现纯化柱中有残留溶液，将收集管倒空，并再次将纯化柱以最大
6 速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管，将GeneJET基因组DNA纯化柱装入1.5ml无菌的 离心管中（未提供）。
向GeneJET基因组DNA纯化柱的膜中心加入200μl洗脱缓冲液以洗脱基因组DNA。
室温放置2分钟后，以8000×g的速度离心1分钟。
注：
7 为了得到最高的DNA产量，可用200μl洗脱缓冲液再次重复洗脱步骤。
如果需要较高浓度的DNA，或者从较少的样本材料（如50μl血液）中提取DNA，所 加入洗脱液的体积可以减少至50-100μl。
但请注意洗脱缓冲液体积越小，洗脱得到的 最终DNA量也会越少。
8 弃掉纯化柱。
将纯化的DNA立即用于下游实验或者贮存于-20℃。
9 D、革兰氏阴性细菌基因组DNA纯化方案 步骤过程 收集多至2×109个细菌细胞于1.5ml或2ml离心管中。
以5000×g的速度离
1 心10分钟。
弃掉上清。
将收集的菌体重悬于180μl消化液中。
加入20μl蛋白酶K溶液，通过涡旋或
2 移液器吹吸充分混匀，获得均质的悬浮液。
将样本置于56℃孵育，期间间或涡旋离心管几次，或使用振荡水浴锅、摇摆
3 平台或恒温混匀仪，直到细胞完全裂解（~30分钟）。
4 加入20μlRNaseA溶液，涡旋混匀，室温孵育10分钟。
5 加入200μl裂解缓冲液，涡旋15秒以完全混匀，得到均质混合物。
6 加入400μl50％的乙醇，通过涡旋或移液器吹吸混合均匀。
将GeneJET基因组DNA纯化柱装入收集管中，将上述得到的裂解溶液加入纯
7 化柱中。
将纯化柱以6000×g的速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管， 将纯化柱放入一个新的2ml收集管中（已提供）。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅰ（已加入乙醇）。
8000×g离心1分钟。
8 倒掉流穿液，将纯化柱放回收集管中。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅱ（已加入乙醇），以最大速度（≥12000 ×g）离心3分钟。
可选：如果发现纯化柱中有残留溶液，将收集管倒空，并再次将纯化柱以最大
9 速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管，将GeneJET基因组DNA纯化柱装入1.5ml无菌的 离心管中（未提供）。
向GeneJET基因组DNA纯化柱的膜中心加入200μl洗脱缓冲液以洗脱基因组DNA。
室温放置2分钟后，以8000×g的速度离心1分钟。
注： 10 为了得到最高的DNA产量，可用200μl洗脱缓冲液再次重复洗脱步骤。
如果需要较高浓度的DNA，或者从较少的样本材料中提取DNA，所加入洗脱液的体 积可以减少至50-100μl。
但请注意洗脱缓冲液体积越小，洗脱得到的最终DNA量也 会越少。
11 弃掉纯化柱。
将纯化的DNA立即用于下游实验或者贮存于-20℃。
10
E、革兰氏阳性细菌基因组DNA纯化方案开始之前： 准备革兰氏阳性细菌裂解缓冲液：20mMTris-HCl，PH8.0，2mMEDTA，1.2％TritonX-100，使用前加入溶解酵素至浓度为20mg/ml。
步骤过程 收集约2×109个细菌细胞于1.5ml或2ml离心管中，以5000×g的速度离心
1 10分钟，弃掉上清。
2 将菌体重悬于180μl革兰氏阳性细菌裂解缓冲液中，37℃孵育30分钟。
加入200μl裂解缓冲液和20μl蛋白酶
K，通过涡旋或移液器吹吸充分混匀，
3 获得均质的悬浮液。
将样本置于56℃孵育，期间间或涡旋离心管几次，或使用振荡水浴锅、摇摆
4 平台或恒温混匀仪，直到细胞完全裂解（~30分钟）。
5 加入20μlRNaseA溶液，涡旋混匀，室温孵育10分钟。
6 加入400μl50％的乙醇，通过涡旋或移液器吹吸混合均匀。
将GeneJET基因组DNA纯化柱装入收集管中，将上述得到的裂解溶液加入纯
7 化柱中。
将纯化柱以6000×g的速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管， 将纯化柱放入一个新的2ml收集管中（已提供）。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅰ（已加入乙醇）。
8000×g离心1分钟。
8 倒掉流穿液，将纯化柱放回收集管中。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅱ（已加入乙醇），以最大速度（≥12000 ×g）离心3分钟。
可选：如果发现纯化柱中有残留溶液，将收集管倒空，并再次将纯化柱以最大
9 速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管，将GeneJET基因组DNA纯化柱装入1.5ml无菌的 离心管中（未提供）。
向GeneJET基因组DNA纯化柱的膜中心加入200μl洗脱缓冲液以洗脱基因组DNA。
室温放置2分钟后，以8000×g的速度离心1分钟。
注： 10 为了得到最高的DNA产量，可用200μl洗脱缓冲液再次重复洗脱步骤。
如果需要较高浓度的DNA，或者从较少的样本材料中提取DNA，所加入洗脱液的体 积可以减少至50-100μl。
但请注意洗脱缓冲液体积越小，洗脱得到的最终DNA量也 会越少。
11 弃掉纯化柱。
将纯化的DNA立即用于下游实验或者贮存于-20℃。
11 F：酵母基因组DNA纯化方案开始之前： 准备酵母裂解缓冲液：5mg/ml酵母裂解酶20T，1M山梨醇，0.1MEDTA。
步骤过程 收集多至1×108个酵母细胞于1.5ml或2ml离心管中，以最大速度（≥12000
1 ×g）离心5-10秒，弃掉上清。
2 将收集的菌体重悬于500μl酵母裂解缓冲液中。
37℃孵育1小时。
3 3000×g离心10分钟，弃掉上清。
将菌体重悬于180μl消化液中。
加入20μl蛋白酶
K，通过涡旋或移液器吹吸
4 充分混匀，获得均质的悬浮液。
将样本置于56℃孵育，期间间或涡旋离心管几次，或使用振荡水浴锅、摇摆
5 平台或恒温混匀仪，直到细胞完全裂解（~45分钟）。
6 加入20μlRNaseA溶液，涡旋混匀，室温孵育10分钟。
7 加入200μl裂解缓冲液，涡旋15秒以完全混匀，得到均质混合物。
8 加入400μl50％的乙醇，通过涡旋或移液器吹吸混合均匀。
将GeneJET基因组DNA纯化柱装入收集管中，将上述得到的裂解溶液加入纯
9 化柱中。
将纯化柱以6000×g的速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管， 将纯化柱放入一个新的2ml收集管中（已提供）。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅰ（已加入乙醇）。
8000×g离心1分钟。
10 倒掉流穿液，将纯化柱放回收集管中。
向纯化柱中加入500μl的漂洗缓冲液Ⅱ（已加入乙醇），以最大速度（≥12000 ×g）离心3分钟。
可选：如果发现纯化柱中有残留溶液，将收集管倒空，并再次将纯化柱以最大 11 速度离心1分钟。
弃掉包含流穿液的收集管，将GeneJET基因组DNA纯化柱装入1.5ml无菌的 离心管中（未提供）。
向GeneJET基因组DNA纯化柱的膜中心加入200μl洗脱缓冲液以洗脱基因组DNA。
室温放置2分钟后，以8000×g的速度离心1分钟。
注： 12 为了得到最高的DNA产量，可用200μl洗脱缓冲液再次重复洗脱步骤。
如果需要较高浓度的DNA，或者从较少的样本材料中提取DNA，所加入洗脱液的体 积可以减少至50-100μl。
但请注意洗脱缓冲液体积越小，洗脱得到的最终DNA量也 会越少。
13 弃掉纯化柱。
将纯化的DNA立即用于下游实验或者贮存于-20℃。
12 疑难解答 问题 纯化的DNA产量低 纯化的DNA降解RNA污染纯化柱堵塞对下游酶反应的抑制 可能的原因及解决方案样品材料过多减少所用样品材料的量，在裂解步骤中不要使用多于提示量的组织和细胞。
样品材料未充分消化在56℃条件下，延长蛋白酶K消化时间，直至完全消化，无剩余颗粒。
裂解液中未加入乙醇在将样品加入纯化柱前，确保向裂解液中加入乙醇。
裂解液未与乙醇充分混合向裂解液中加入乙醇后，通过涡旋或移液器吹吸使样品充分混匀。
漂洗缓冲液中未加入乙醇确保首次使用漂洗缓冲液1和2时向其中加入乙醇，按照第3页关于漂洗缓冲液的说明。
样品反复冻融应避免样品的反复冻融。
使用新的样品提取DNA，尽可能采用新鲜材料。
样品贮存条件不合适使用前将哺乳动物组织贮存于-70℃，将细菌贮存于-20℃。
全血在4℃条件下贮存不能超过1-2天。
血液样品若需长期贮存，可分装为200μl，然后贮存于-20℃。
未进行RNaseA酶处理按照纯化方案中的描述进行RNaseA处理。
样品材料过多减少所用样品材料的量。
对于裂解液制备，推荐材料最大量为：2×109个细菌细胞，5×106个悬浮细胞，20mg哺乳动物组织。
组织未完全消化在56℃条件下，延长蛋白酶K消化时间，直至完全消化，无剩余颗粒。
纯化的DNA中含有残留乙醇如果用漂洗缓冲液Ⅱ漂洗以后，发现纯化柱中有残留溶液，需将收集管倒空，并再次将纯化柱以最大速度离心1分钟。
洗脱的RNA中含有盐分按照正确的顺序使用漂洗缓冲液。
始终先用漂洗缓冲液Ⅰ，再用漂洗缓冲液Ⅱ。
13 安全信息 裂解液、漂洗缓冲液Ⅰ Xn有害辨别危险的成分标签：盐酸胍 风险术语 R22 吞食有害 R36/38对眼睛和皮肤具有刺激性 安全术语 S23 请勿吸入气体/烟雾/蒸汽/喷雾 S26 若溅入眼睛，立即用大量清水冲洗，并寻求医生治疗 S36/37穿戴合适的防护服和手套 S60 该物质及其容器必须作为危险废物处置 蛋白酶
K Xn有害
辨别危险的成分标签：蛋白酶
风险术语
R42
吞食有害
安全术语
S23
请勿吸入气体/烟雾/蒸汽/喷雾
S36
穿戴合适的防护服
S45
发生事故时或感觉不适时，立即求医（可能时出示标签）
S60
该物质及其容器必须作为危险废物处置
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参考文献
1.
R.,C.J.A.Sol,
M.M.M.Salimans,
C.L.Jansen,
P.M.E.W.Dillen,andJ.vanderNoordaa.1990.Rapidandsimplemethodforpurificationofnucleicacids.J.Clin.Microbiol.28:495–503. 产品使用限制本产品的开发、设计及销售专供研究和体外试验使用。
本产品不得用于诊断试验或药物 开发，也不适合向人或动物注射。
了解本产品的材料安全数据表，请浏览/onebio。
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